بررسي بيان و تيترآنتي‌ بادي پروتئين نوتركيب نوكلئوكپسيد به عنوان يك كانديد ايمونوژن عليه ويروس سارس‌ كوو2

هدف: همه‌گيري بيماري كوويد-19 نتيجه عفونت ناشي از ويروس سارس‌كوو2 است. آناليز تكاملي بر اساس هم‌رديفي توالي اسيد‌نوكلئيك نشان مي‌دهد سارس‌كوو2 عضوي از جنس بتا‌كروناويروس‌ها بوده و ژنوم آن متشكل از يك RNA تك‌رشته‌اي مثبت و كد‌كننده 16 پروتئين مي‌‌باشد. در بين پروتئين‌هاي ساختاري نوكلئوكپسيد فراوان‌ترين پروتئين در كروناويروس‌ها بوده و توالي آمينواسيدي آن تا حد زيادي حفاظت شده است. با توجه به بروز جهش‌هاي زياد در پروتئين اسپايك، هدف از اين تحقيق بررسي بيوانفورماتيكي، بيان پروتئين نوكلئوكپسيد و ارزيابي ايمونژنيسيتيه آن به عنوان يك كانديد ايمونوژن بود. مواد و روش‌ها: بررسي اپي‌توپ‌هاي سلول B و T پروتئين نوكلئوكپسيد در پايگاه داده IEDB انجام شد. پلاسميد pET28a-N به ميزبان بياني E.coli BL21 (DE3) ترانسفر و بيان پروتئين نوتركيب با القاگري IPTG انجام شد. تخليص پروتئين نوتركيب با روش كروماتوگرافي تمايلي ستون Ni-NTA انجام و جهت تائيد آن از روش وسترن بلاتينگ استفاده گرديد. در نهايت ايمني‌زايي موش‌ها با پروتئين نوتركيب طي سه دوز صورت گرفت. يافته‌ها: ژن بهينه‌سازي شده شاخص سازگاري كدون 0.97 را دارا شد. درصد كدون‌هاي با شيوع بالا در ژن به 85 درصد بهبود يافت. بيان پروتئين نوتركيب در ميزبان E.coli منجر به توليد پروتئين نوتركيب با وزن 45 كيلودالتون شد. ميزان پروتئين خالص شده براي هر ليتر از محيط 43 ميلي‌گرم بود. ايمن‌سازي موش‌ها پاسخ آنتي‌بادي سرمي را القا كرد. آناليز‌هاي آماري نشان داد كه ميزان تيتر آنتي‌بادي در مقايسه با نمونه كنترل به‌طور قابل‌ توجهي تفاوت معني‌داري دارد و تيتر آنتي‌بادي تا رقت 1.256000 قابل قبول بود. نتيجه‌گيري: طبق نتايج اين پژوهش، پروتئين نوتركيب نوكلئوكپسيد مي‌تواند به عنوان يك كانديد ايمونوژن جهت توسعه واكسن‌هاي عليه ويروس سارس‌كوو2 در تحقيقات بعدي استفاده شود.