دست‌كاري ژنتيكي باكتري پروبيوتيك لاكتوكوكوس لاكتيس به منظور توليد پروتئين OMP10 بروسلا آبورتوس

هدف: در تمام گونه‌هاي باكتري بروسلا، توالي ژن Omp10 حفاظت شده است. خاصيت آنتي‌ژنيسيته بالاي محصول اين ژن مي‌تواند باعث تحريك سيستم ايمني ميزبان شود. استفاده از باكتري پروبيوتيك لاكتوكوكوس لاكتيس به عنوان حامل زنده علاوه بر ايمن بودن، براي توليد پروتئين‌هاي نوتركيب و انتقال ژن به سلول‌هاي يوكاريوتي مناسب است. OMP10 جزئي از ليپوپروتئين‌هاي سطحي در غشاي خارجي بروسلا با خاصيت ايمني‌زايي بسيار بالا است كه در جذب مواد مغذي، انتقال سيگنال، چسبندگي و مقاومت آنتي‌بيوتيكي نقش اساسي دارد. اين پروتئين داراي خواص آنتي‌ژنيك بوده و مي‌تواند به صورت متصل با آنتي‌ژن‌هاي ديگر، داراي نقش كمكي باشد. لذا هدف از اين تحقيق ايجاد باكتري پروبيوتيك لاكتوكوكوس لاكتيس به منظور توليد پروتئين OMP10 بروسلا آبورتوس مي‌باشد.مواد و روش‌ها: ژن Omp10 باكتري بروسلا آبورتوس همراه با سيگنال پپتيد Usp45 به صورت سنتتيك در وكتور pNZ8148 كلون شد. وكتور نوتركيب ابتدا در باكتري اشريشياكلي سويه‌ي TOP10 تكثير و سپس توسط كيت استخراج پلاسميد خالص‌سازي شد. غلظت پلاسميد استخراج شده توسط نانودراپ سنجيده شد. pNZ8148-Usp45-Omp10 توسط روش الكتروپوريشن، به درون باكتري لاكتوكوكوس لاكتيس ترانسفورم شد. تاييد كلونينگ و بررسي بيان ژن Omp10 توسط تكنيك‌هاي RT-PCR، هضم آنزيمي و SDS-PAGE انجام گرفت.يافته‌ها: نتايج نشان‌دهنده بيان موفقيت‌آميز ژن هدف Omp10 در باكتري پروبيوتيك لاكتوكوكوس لاكتيس بود و پروتئين نوتركيب به خوبي در اين باكتري پروبيوتيك بيان شد.نتيجه‌گيري: پژوهش حاضر نشان داد كه پروتئين Omp10 در باكتري‌ پروبيوتيك لاكتوكوكوس لاكتيس ترانسفورم شده توسط الكتروپوريشن با وكتور نوتركيب pNZ8148-Usp45-Omp10 بيان مي‌شود. لاكتوكوكوس لاكتيس ترانسفورم شده در مطالعه حاضر، مي‌تواند در مطالعات آينده به عنوان واكسن زير واحد خوراكي جهت پيشگيري از بروسلوز، مناسب باشد.