بهينه سازي تخليص پروتئين لايه S از سويه Deinococcus radiodurans R1

پروتئين ‌هاي لايه سطحي Deinococcus radiodurans يكي از بهترين سيستم هاي خودآرايي در بين پروتئين‌هاي ديگر هستند كه نقش اساسي در ساخت نانوسيم ها دارند. بنابراين لازم است اين پروتئين‌ها خالص سازي شوند. هدف از اين تحقيق بهينه سازي خالص سازي پروتئين لايه سطحي از D. radiodurans با روش سطح پاسخ است. ابتدا سه عامل غلظت SDS، زمان انكوباسيون و درصد جرم در پنج سطح در نظر گرفته شد و 20 اجرا با نرم افزار Design-Expert با روش مركب مركزي طراحي شد. هر مرحله شامل كشت ميكروب، آماده سازي سلول انبوه، انكوباسيون ميكروب در غلظت خاص SDS و زمان و درصد جرم، جداسازي باكتري از مواد شوينده با سانتريفيوژ در g5000، ته نشيني پروتئين‌هاي لايه سطحي از محلول شوينده با سانتريفيوژ در g20000، تعيين غلظت و خلوص پروتئين به ترتيب با روش برادفورد و SDS-PAGE است. در نهايت داده‌هاي به دست آمده مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت. تجزيه و تحليل نتايج نشان داد كه در سطح اطمينان 95 درصد، تأثير فاكتور غلظت ماده شوينده بر درصد پروتئين خالص شده بيشتر از ساير عوامل بود. نتايج بهينه سازي فاكتورها بدين صورت بود: غلظت SDS 64/5 درصد، درصد جرم 7/33 درصد و 3 ساعت زمان انكوباسيون. در شرايط بهينه، غلظت پروتئين و درصد خلوص به ترتيب mg/ml 0/584 و 47/61 درصد به دست آمد.