بهينه سازي توليد پپتيبادي روميپلاستيم نوتركيب در اشرشيا كلي

پيش‌زمينه و هدف: روميپلاستيم يك پروتئين پيوندي مي‌باشد كه در بدن عملكردي مشابه با پروتئين ترومبوپويتين دارد و بدين وسيله باعث تحريك مغز استخوان براي ساخت بيش‌تر پلاكت مي‌شود. ترومبوپويتين هورموني است كه توليد پلاكت را كنترل مي‌كند. داروي روميپلاستيم در درمان ترومبوسيتوپني در بيماران داراي ايميون ترومبوسيتوپني مزمن (ITP) زماني كه ساير داروها مانند گورتيكواستروئيدها و ايمنوگلوبولين ها و يا عمل جراحي برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده مي‌شود. هدف از اين مطالعه، كلونينگ و بهينه‌سازي شرايط بيان ژن و خالص‌سازي پپتيبادي روميپلاستيم نوتركيب در باكتري اشرشيا كلي بود.مواد و روش كار: در اين مطالعه كاربردي، متغيرهاي مستقل مورد استفاده شامل ميزان OD (0.4، 0.8 و 1.2) در طول موج 600 نانومتر، غلظت IPTG (0.5، 1 و 1.5 ميلي مولار) و نوع محيط كشت (LB, TB, M9) بودند كه از روش سطح پاسخ (RSM (Response Surface Methodology)) در قالب طرح مركب مركزي با نرم‌افزار Design-Expert 12 براي پيش‌بيني متغيرهاي مستقل بر ميزان توليد روميپلاستيم استفاده گرديد.يافته‌ها: ميزان OD برابر 0.8، غلظت IPTG برابر 1 ميلي مولار و محيط كشت LB بهترين حالت براي توليد پپتيبادي روميپلاستيم نوتركيب بهينه سازي شد. بحث و نتيجه‌گيري: از آنجائيكه توليد بهينه پپتيبادي مورد نظر بود، كلونينگ و بهينه‌سازي شرايط بيان ژن و خالص‌سازي پپتيبادي روميپلاستيم در سويه BL21 از باكتري اشرشيا كلي با بهينه‌ترين شرايط كه توسط RSM انجام گرديد، صورت گرفت. همچنين براي اينكه پروتئين به نحو صحيح فولد شود، از مرحله ريفولدينگ در ابتداي خالص‌سازي استفاده شد. پروتئين‌هاي دارويي نقش مهمي در درمان‌هاي نوين پزشكي مولكولي دارند.