كلونينگ، بيان و تخليص ديابادي Anti-PDL-1 – Anti- CTLA-4 در ميزبان E.coli با استفاده از تگ pelB

نقاط بازرسي ايمني، مولكول هايي هستند كه سيستم ايمني را تنظيم مي‌كنند. برخي از سلول هاي تومور مي توانند ليگاندهاي متصل شونده به اين نقاط بازرسي ايمني را براي فرار از پاسخ هاي ايمني ضد توموري بيان كنند. برخي از عوامل، مانند آنتي بادي ها، مي توانند اين نقاط بازرسي را مهار كنند. هدف از اين مطالعه بيان يك ديا‌بادي دو منظوره جديد در فضاي پري پلاسميك باكتري E. coli BL21(DE3)  براي مهار همزمان‌ دو نقطه بازرسي ايمني، پروتئين مرتبط با ۴ (CTLA 4) و ليگاند متصل شونده (PD L1)  است. ديا‌بادي دو منظوره بر اساس ژن نواحي متغير آنتي‌بادي‌هاي anti PD-L1 و anti CTLA 4 طراحي و جهت بيان درباكتري  E. coli BL21(DE3) بهينه سازي و در پلاسميد بياني pET21 كلون شد. پس از ترنسفرم كردن به داخل سويه بياني E. coli BL21(DE3) اثر شرايط بياني مختلف كشت مورد بررسي قرار گرفت، بيانDia-21 با وزن مولكولي ۵۵كيلو دالتون با الكتروفورز ژل SDS-PAGE و وسترن بلات تأييد شد. بهترين شرايط براي بيان پري پلاسميك به فرم محلول بيان با 0/5 ميلي مولار IPTG در دماي 23 درجه سانتي گراد محيط كشتLB  و زمان ۱۸ ساعت به دست آمد. پروتئين بيان شده سپس با استفاده از كروماتوگرافي تمايلي نيكل آگارز با بازده نهايي 0/4 ميلي گرم در ليتر تخليص و نهايت ميل تركيبي برهمكنش پروتئين خالص شده توسط  Cell-ELISA  بررسي شد. پروتئين ديا‌بادي نوتركيب در يك سيستم باكتريايي بيان و خالص‌سازي و برهم‌كنش پروتئين ديا‌بادي نوتركيب  باگيرنده سطح سلولي PDL-1 از طريق Cell-Elisa بررسي شد.