بيان و سنتز فاكتور VIII انعقادي نوتركيب انساني با استفاده از سيستم بياني بدون سلول

سابقه و هدف: بيماري هموفيلي نوع A، شايع‌ترين نوع اين بيماري است. جهت درمان بيماران هموفيلي، كنسانتره تزريقي فاكتور VIII انساني، به دو صورت مشتق از پلاسما و نوتركيب در بازار وجود دارد. با توجه به خطر ابتلا به بيماري‌هاي عفوني در اثر تزريق خون يا محصولات خوني اهدايي از جمله فاكتور VIII مشتق از پلاسما، مي‌توان از فاكتور VIII نوتركيب كه از لحاظ ايمني بي‌خطر، داراي خلوص بالاتر از نمونه مشتق از خون بوده و نيز نيمه عمر طولاني‌تري در خون بيماران مصرف كننده دارد، استفاده نمود. هدف از اين مطالعه، بيان و سنتز فاكتور VIII نوتركيب انساني با استفاده از سيستم بياني يوكاريوتي عاري از سلول به عنوان استراتژي نوين سنتز داروهاي نوتركيب مي‌باشد.مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي وكتور pcDNA3 حاوي قطعه ژني بدون دمين B فاكتور VIII انعقاد خون، به داخل باكتري DH5α مستعد شده، ترانسفورم گرديد. پس از تكثير باكتري و افزايش وكتور مورد نظر، در اين مرحله وكتور تكثير يافته استخراج شد و كيفيت و غلظت آن تعيين گرديد. سپس سلول‌هاي يوكاريوتي CHO-K1 كشت داده شدند و از تراكم بيش از ده ميليون سلول آن‌ها، عصاره سلولي تهيه شد. وكتور استخراج شده با عصاره سلولي و محلول بياني تركيب و فرآيند بيان در دماي °C30 و °C37 انجام شد. ميزان بيان با تكنيك‌هاي الايزا و دات بلات بررسي گرديد.يافته‌ها: در اين پژوهش با تكنيك الايزا ميزان بيان فاكتور VIII انعقاد خون نوتركيب انساني در نمونه پايه با دماي °C30، نمونه 2 با دماي °C30، نمونه پايه با دماي °C37 و نمونه 4 كنترل منفي با دماي °C30 در مدت 20 ساعت به ترتيب 275، 276، 273 و صفر نانوگرم در ميلي‌ليتر گزارش شد. در تكنيك دات بلات نيز نتايج كمي ذكر شده به صورت كيفي با شدت رنگ لكه‌ها تائيد گرديد.نتيجه‌گيري: نتايج حاصل نشان داد كه از روش بيان عاري از سلول مي‌توان براي سنتز فاكتور VIII نوتركيب استفاده نمود. شرايط بكار گرفته شده در اين پژوهش جهت بيان بدون سلول فاكتور VIII نوتركيب، نسبت حجمي 50/50 از عصاره سلولي CHO-K1 مناسب بوده است و محلول بياني پايه در دماي °C30 بيشترين غلظت محصول را بيان نمود. به دليل استفاده از عصاره سلولي يوكاريوتي CHO-K1، فاكتور VIII نوتركيب انساني سنتز شده داراي تغييرات پس از ترجمه است كه جهت عملكردي بودن اين پروتئين در بدن انسان بسيار مهم مي‌باشد.