بررسي اثر سميت فولينيك اسيد بر رده سلول‌هاي فيبروبلاست لثه انساني

سابقه و هدف: از آن‌جايي‌كه آفت دهاني بسيار دردناك است و درمان قطعي براي آن معرفي نشده است، تلاش در زمينه تهيه دارويي كه اين بيماري را كنترل نمايد، بسيار مفيد مي‌باشد. اسيد فولينيك مشتق 5 فرميل اسيد تتراهيدروفوليك است. برخلاف اسيد فوليك (شكل مصنوعي فولات)، اسيد فولينيك يكي از اشكال فولات است كه به‌طور طبيعي در غذاها يافت مي‌شود. در بدن، اسيد فولينيك مي‌تواند به ساير اشكال فعال فولات تبديل شود و فعاليت ويتامين كامل اسيد فوليك را دارد. از آن‌جايي‌كه اسيد فولينيك، داراي اثرات ترميم زخم است، ممكن است نقش مهمي در تسريع بهبود زخم‌هاي آفتي داشته باشد. اين مطالعه با هدف بررسي تأثير اسيد فولينيك بر رشد سلول‌هاي فيبروبلاست لثه به‌عنوان يك درمان بالقوه براي زخم‌هاي دهان، انجام پذيرفت. با تعيين دوز بهينه، اسيد فولينيك مي‌تواند به‌عنوان يك گزينه درماني توصيه شده براي افراد مبتلا به زخم دهان مانند افت پيشنهاد شود.مواد و روش‌ها: طي اين مطالعه تجربي، رده‌هاي سلولي فيبروبلاست لثه انساني در شرايط استريل در محيط كشت DMEM و سرم گاوي 10 درصد و آنتي‌بيوتيك پني‌سيلين و تتراسيكلين 1 درصد در دماي 37 درجه كشت داده شدند. اين سلول‌ها در معرض غلظت‌هاي مختلف از داروي فولينيك اسيد (5، 20، 25، 30، 40، 50، 80 و 100 ميكرومولار) قرار گرفتند. روش MTT براي ارزيابي زنده ماني سلول‌ها و تعيين IC50 (غلظت مهاري) استفاده شد. در اين آزمايش به‌دليل مشخص نبودن دامنه سميت آن بر روي سلول‌ها در يك مرحله به‌صورت پـايلوت و تكرارهاي كم، سميت نسبي تعيين شد. هر غلظت چهار بار تكرار شد و در زمان‌هاي مختلف (24، 48 و 72 ساعت) انكوبه شد. پس از زمان انكوباسيون، محيط رويي هر چاهك دور ريخته و به هر چاهك 100 ميكروليتر محلول MTT اضافه شد. پس از چهار ساعت انكوباسيون، محلول رويي دور ريخته و 100 ميكروليتر DMSO اضافه شد. سپس با استفاده از دستگاه اليزا ريدر، جذب نوري هر چاهك در طول موج 540-690 نانومتر اندازه‌گيري شد. در نهايت IC50 كه نشان‌دهنده غلظت داروي لازم براي مهار 50 درصد رشد سلول است با استفاده از منحني رشد محاسبه شد و نتايج با استفاده از نرمافزار SPSS (نسخه 19) مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت.يافته‌ها: در اين مطالعه اثر سميت سلولي فولينيك اسيد بر رده سلولي فيبروبلاست لثه انساني (HGF1) در محيط كشت سلولي در سه زمان در غلظت‌هاي مختلف بررسي شد. نتايج نشان داد در 24 ساعت تا غلظت 100 ميكرومولار هنوز 70 درصد از سلول‌ها زنده ماندند كه اين مورد مي‌تواند نشانگر استفاده موثر از اين دارو براي درمان آسيب‌هاي ضايعات آفتي باشد. در 48 ساعت 78/1=IC50 ميكرومولار به‌دست آمدكه اين نشانگر اين است كه در مطالعاتي با محدوده زماني 48 ساعت مي‌توان تا دوز نزديك80 ميكرومولار از فولينيك اسيد جهت استفاده از تاثيرات درماني اين دارو استفاده كرد. در 72 ساعت IC50 برابر با66/7 ميكرومولار محاسبه گرديد.استنتاج: يافته‌هاي اين مطالعه نشان داد كه غلظت‌هاي بالاتر اسيد فوليك در ابتدا براي دستيابي به كاهش قابل توجهي در رشد سلولي مورد نياز است، اما با قرار گرفتن در معرض طولاني‌تر، غلظت‌هاي پايين‌تر مي‌تواند موثر باشد.