بررسي نقش محافظتي كوئرستين بر حيات سلول‌هاي نرمال تخمدان مواجه شده با داروي كلوميفن سيترات و ارتباط با بيان ژن p53

سابقه و هدف: ناباروري، يكي از مشكلات عديده پزشكي در دنياي امروز است. داروي كلوميفن سيترات براي درمان ناباروري استفاده مي‌شود. از عوارض اين دارو ايجاد بافت توموري در تخمدان مي‌باشد. كوئرستين يك فلاونوئيد است كه به طور فراوان در طبيعت يافت مي‌شود. كوئرستين در بسياري از ميوه‌ها، سبزيجات، برگ‌ها، دانه‌ها و غلات يافت مي‌شود. كوئرستين، پتانسيل استفاده در درمان سرطان را دارد. شناخته‌شده‌ترين و شايع‌ترين ژن سركوبگر تومور در انسان، ژن p53 است. ژن p53 در سال 1979 كشف شد و در سال 1989 به عنوان يك ژن مهاركننده تومور شناخته شد. اين ژن در سال 1992 به دليل نقشي كه در حفظ ثبات ژنوم داشت به عنوان نگهبان ژنوم شناخته شد. ژن p53 متداول‌ترين ژن جهش يافته در سرطان‌هاي انسان است. اين مطالعه با هدف بررسي نقش محافظتي كوئرستين بر حيات سلول‌هاي نرمال تخمدان مواجه شده با داروي كلوميفن سيترات و ارتباط با بيان ژن p53، انجام پذيرفت. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه آزمايشگاهي مداخله‌اي و از نوع كار تحقيقاتي از نوع كاربردي، از سلول‌هاي نرمال تخمدان رده‌ي سلوليCHO استفاده شد. غلظت‌هاي 1000، 500، 100، 50، 10 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتركوئرستين و 50 ميكرومولار داروي كلوميفن سيترات و 0.29 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر سيس پلاتين تهيه و به‌مدت 24 ساعت به سلول‌هاي كشت داده شده اضافه شد. در اين مطالعه داروي كلوميفن سيترات و داروي سيس پلاتين هر دو به‌عنوان كنترل مثبت مي‌باشند. ارزيابي حيات سلول‌ها به روش MTT assay انجام شد. ابتدا RNA استخراج و سپس بيان ژن p53 با دستگاه Real-Time PCR مورد بررسي و آناليز قرار گرفت. در اين مطالعه آغازگر مورد استفاده براي ژن p53 با استفاده از سايت‌هاي NCBI و primer3 طراحي شد. در اين مطالعه ژن كنترل داخلي GAPDH مي‌باشد. يافته‌ها: نتايج اين مطالعه نشان داد كه غلظت‌هاي 1000، 500، 100، 50 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر كوئرستين با كاهش سميت داروي كلوميفن سيترات و داروي سيس پلاتين (هر دو به عنوان كنترل مثبت) باعث افزايش حيات سلولي مي‌شود به‌طوري‌كه هر چه غلظت كوئرستين بيش‌تر شد، تعداد سلول‌هاي زنده بيش‌تر مي‌شود و در غلظت 1000 ميلي‌گرم بر ميلي‌ليتر كوئرستين تعداد سلول‌هاي زنده به 83 درصد رسيد. نتايج حاصل از آزمون Real-time PCR بيانگر آن است كه، كوئرستين به‌طور معني‌داري باعث افزايش بيان ژن p53 در مقايسه با گروه كنترل مثبت (داروي كلوميفن سيترات) و كنترل منفي شد (p 05.0). در غلظت‌هاي 500 (0020.0=P) و 1000 (p 0001.0) كوئرستين در مقايسه با داروي كلوميفن سيترات، اين افزايش بيان چشمگيرتر بود. هم‌چنين در غلظت‌هاي 500 (p 0001.0) و1000 (p 0001.0) كوئرستين در مقايسه با كنترل منفي، افزايش بيان چشمگيري در ژن p53 مشاهده شد. استنتاج: يافته‌هاي حاصل از اين بررسي نشان داد كه، كوئرستين احتمالا باعث مهار سميت سلولي حاصل از داروي كلوميفن سيترات و افزايش ميزان بيان ژن p53 مي‌شود و ميزان اثربخشي آن وابسته به دوز مي‌باشد. ‌بنابراين مطالعه حاضر تا حدي مي‌تواند بيان‌كننده نقش كوئرستين در فرآيند مهار تومورزايي در گسترش سرطان در سلو‌ل‌هاي نرمال تخمدان باشد.