بررسي اثرات محافظتي اسيد آمينه ال-آرژنين بر سميت سلولي، ژنتيكي و استرس اكسيداتيو ناشي از سيس پلاتين در سلول‌هاي نرمال كليوي و لنفوسيت‌هاي خوني انسان

سابقه و هدف: ال-آرژنين به‌عنوان يك اسيد آمينه ضروري است و براي سنتز گلوتاتيون استفاده مي‌شود و از آن‌جايي‌كه پيش‌ساز نيتريك اكسايد نيز مي‌باشد مي‌تواند به‌عنوان پاك‌كننده‌ي راديكال‌هاي آزاد و مهاركننده‌ي پراكسيداسيون ليپيدي عمل كند. از اين‌رو مطالعه حاضر با هدف بررسي اثرحفاظتي ال-آرژنين بر سميت سلولي، ژنتيكي و استرس اكسيداتيو ناشي از سيس پلاتين در سلول‌هاي نرمال كليوي و لنفوسيت‌هاي خوني انسان انجام شد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، از سلول‌هاي نرمال كليوي رده سلوليvero و لنفوسيت‌هاي خوني انسان استفاده شد. سلول‌هاي vero با غلظت‌هاي مختلف ال-آرژنين (9/35، 18/75، 37/5، 75، 150 و 300 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر) با دوز آسيب‌زاي سيس پلاتين (1/7 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر) به‌صورت پيش تيمار بررسي شدند. ارزيابي بقا و زنده ماني سلولي و تعيين IC50 (غلظت مهاري) توسط تست MTT انجام شد. جهت بررسي سميت ژنتيكي، با استفاده از سرنگ هپارينه 5 ميلي‌ليترنمونه خون وريدي از يك داوطلب سالم غير سيگاري و غير الكلي گرفته شد و بعد از جداسازي لنفوسيت‌ها، غلظت‌هاي مختلف ال-آرژنين با سيس پلاتين در دوز بهينه القاكنندگي سميت پيش درماني شدند. جهت ارزيابي توليد ميكرونوكلئوس در لنفوسيت‌هاي دو هسته‌اي مهار شده در ستوكينز لام تهيه و توسط ميكروسكوپ نوري بررسي شد. هم‌چنين تست‌هاي استرس اكسيداتيو (ارزيابي ميزان ROS و MDA) مورد سنجش قرار گرفتند كه انـدازه‌گيري ميزان ROS سلول با دستگاه فلـوريمتري و بــا اســتفاده از معرف DA-DCFH انجام شـد. براي سنجش ميزان مالون دي‌آلدهيد(MDA) توليد شده در فرآيند ليپيد پراكسيداسيون از معرف تيوباربيتوريك اسيد(TBA) استفاده شد. بررسي داده‌ها با استفاده از آناليز واريانس يك طرفه توسط نرم‌افزار GraphPad Prism.8 مورد تجزيه و تحليل قرارگرفت. يافته‌ها: اثرات سميت سلولي سيس پلاتين در انكوباسيون 48 ساعته با غلظت‌هاي مختلف (0/39، 0/78، 1/56، 3/12، 6/25، 12.5، 25 و 50 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر) به‌صورت وابسته به دوز مشخص شد و ميزان IC50 7/1 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر به‌دست آمد. براساس نتايج اين مطالعه، پيش درماني با ال-آرژنين در غلظت‌هاي 18/75، 37/5، 75، 150 و 300 ميكروگرم برميلي‌ليتر با سيس پلاتين 1/7 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر، به‌طور قابل توجهي اثرات سيتوتوكسيك را كاهش داد به‌طوري‌كه با افزايش غلظت ال-آرژنين، حيات سلول‌هاي نرمال ريوي در مقايسه با سيس پلاتين به تنهايي به‌عنوان گروه كنترل مثبت افزايش يافت. از سوي ديگر نتايج حاصل از تست ميكرونوكلئوس نشان داد كه ال-آرژنين به‌طور معناداري سبب مهار سميت ژنتيكي سيس پلاتين درلنفوسيت‌هاي خوني انسان شد. به‌طوري‌كه درغلظت 75/18 داراي اختلاف معنادار با گروه كنترل مثبت بود(0/05P ) و در غلظت‌هاي 37/5الي 300 ميكروگرم بر ميلي‌ليتراين اختلاف معناداري مشهود بود(0/001P ). هم‌چنين با تجويز ال-آرژنين در غلظت‌هاي مختلف، ميزان استرس اكسيداتيو ناشي از سيس پلاتين از طريق كاهش توليد گونه‌هاي فعال اكسيژن (ROS) و مالون دي‌آلدهيد(MDA) مشاهده شد. از لحاظ آماري، ال-آرژنين در تمامي غلظت‌ها داراي اختلاف معنادار با گروه كنترل مثبت بود(0/001P ). استنتاج: نتايج مطالعه حاضر نشان داد، ال-آرژنين به‌عنوان يك تركيب آنتي‌اكسيدان، سميت سلولي و ژنتيكي و استرس اكسيداتيو ناشي از سيس پلاتين را در سلول‌هاي نرمال ريوي كليوي(vero) و لنفوسيت‌هاي خوني انسان تعديل كرد و اثرات محافظتي قابل ملاحظه‌اي را از خود نشان داد. از اين‌رو مي‌توان اين اميد را داشت كه به‌عنوان يك ماده پيشگيري‌كننده مورد استفاده قرارگيرد.