شناسايي سريع گونه گوسفند (Ovis aries) در نمونه گوشت با استفاده از روش تكثير هم دما

سابقه و هدف: با افزايش مصرف فرآورده هاي گوشتي، موارد تقلب در گوشت بيشتر و فراگيرتر شده است. يكي از اشكال رايج تقلب، جايگزيني گوشت هاي قرمز كم ارزش، مانند گوشت بز يا گاو، به جاي گونه هاي با ارزش تر مانند گوشت گوسفند است. در نتيجه، تقاضاي فزاينده اي براي روش هاي سريع و دقيق براي شناسايي گونه هاي گوشتي وجود دارد. در حالي كه روش‌هاي مبتني بر پروتئين و DNA، مانند ELISA و PCR، ابزار ارزشمندي براي شناسايي گونه‌ها هستند، زنجيره كوتاه توليد و مصرف فرآورده‌هاي گوشتي نياز به آزمايش‌هاي سريع و دقيق دارد كه مي‌تواند در محل مورد نياز انجام شود. آزمايشگاه هاي مجهز در اين مطالعه، ما از تكثير هم‌دما با واسطه حلقه (LAMP) براي شناسايي اختصاصي گوشت گوسفند استفاده كرديم. مجموعه اي از چهار پرايمر با هدف قرار دادن ژن سيتوكروم b ميتوكندريايي (Cytb) طراحي شد. اختصاصيت و حد تشخيص اين پرايمرها با روش استاندارد PCR كه بيشتر در آزمايشگاههاي كنترل مواد غذايي متداول است، بررسي و مقايسه شد.مواد و روش ها: در اين پژوهش، براي شناسايي اختصاصي نمونه‌ي گوشت گوسفند، با استفاده از نرم‌افزار PrimerExplorer، مجموعه‌ي 4 عددي از آغازگر هاي LAMP براي ژن Cyt b طراحي شد. DNA نمونه بافت هاي گوشتي با استفاده از روش NaOH استخراج و براي استفاده در مراحل بعدي بكار برده شدند. به منظور تعيين اختصاصي بودن آغازگرها، آزمون LAMP براي پنل نمونه هاي هدف و غيرهدف انجام شد. همچنين به منظور تعيين حد تشخيص آغازگر هاي طراحي شده و مقايسه‌ي دو روش LAMP و PCR با همديگر، دو آزمون ياد شده براي سري رقت تهيه شده از DNA گوسفند انجام و نتايج با هم مقايسه شدند. در انتها براي بهينه سازي كيت تشخيصي براي شرايط محيط خارج آزمايشگاهي، نتايج با رنگ SYTO 24 نيز مشخص شدند.يافته‌ها: نتايج كسب شده نشان دادند آغازگر هاي اختصاصي LAMP قادر به شناسايي دقيق گوشت گوسفند از گوشت هاي غير هدف ديگر است. همچنين روش آزمايشگاهي طراحي شده در اين تحقيق قابليت شناسايي اختصاصيDNA گوسفند به ميزان pg µl-1.17 در كمتر از نيم ساعت از زمان نمونه برداري را دارا است كه اين ميزان ، قدرت تشخيص ده برابري نسبت به روش PCR را نشان داد. از طرفي ديگر، با استفاده از نتايج بدست آمده از بكارگيري رنگ SYTO 24، استفاده‌ي موثر از اين روش در محيط خارج آزمايشگاه اثبات شد چرا كه استفاده از اين روش برايPCR به دليل محصول كمتر نسبت به روش LAMP مقدور نيست.نتيجه‌گيري: اين روش به دليل سادگي و سهولت تجهيزات، حساسيت بالا، عملكرد خاص بين گونه هاي نزديك و زمان واكنش كوتاه، پتانسيل قابل توجهي براي تشخيص تقلب گوشت، به ويژه در مكان هاي دور با دسترسي محدود به آزمايشگاه و پرسنل تحصيل كرده دارد.