طراحي، ساخت و بررسي كيت تشخيصي واكنش زنجيره‌اي پليمراز در زمان واقعي(real-time PCR) كوويدـ19

زمينه و هدف: تشخيص دقيق و حساس RNA كوويدـ19 از ارزش تشخيصي بسيار بالايي برخوردار است. واكنش زنجيره‌اي پليمراز در زمان واقعي(real-time PCR) دقيق‌ترين تست تشخيصي(استاندارد طلايي) كوويدـ19 شناخته مي‌شود كه RNA يا ماده ژنتيكي اختصاصي ويروس را رديابي مي‌كند و مي‌تواند ويروس را طي چند روز پس از ابتلا به عفونت تشخيص دهد. لذا هدف از اين مطالعه, تعيين و طراحي يك روش حساس بر پايه Real-time PCR براي تشخيص كوويدـ19 مي‌باشد.روش بررسي: اين يك مطالعه تجربي ـ كاربردي مي باشد. تمامي نمونه‌گيري‌ها و تست‌هاي آزمايشگاهي در مركز آموزشي درماني امام رضا(ع) لارستان، آزمايشگاه مولكولي تشخيص كرونا دانشكده علوم پزشكي لارستان و مركز تحقيقات بيولوژي سلولي و مولكولي دانشكده علوم پزشكي لارستان در سال 1400 انجام شد. آغازگرها و كاوشگر اختصاصي كوويدـ19 براي جايگاه ژني ژن‌هاي N و RdRp به وسيله نرم افزار اليگو 7 طراحي و سپس با استفاده از سايت NCBI بلاست شد. پس از سنتز آغازگرها و كاوشگرها، كيت real-time PCR بر روي 100 نمونه مثبت امتحان و تست‌‍‌هاي حساسيت(sensitivity)، اختصاصيت(specificity)، پايداري(stability) و اعتبارسنجي(validation) انجام شد. داده هاي جمع آوري شده با استفاده از آزمون حساسيت و اختصاصيت باليني تجزيه و تحليل شدند.يافته‌ها: كيت طراحي ‌شده در اين مطالعه قادر به شناسايي تمامي نمونه‌هاي مثبت كوويدـ19 بود. در تست تعيين حساسيت، ميزان حد تشخيص (Limit of Detection; LOD) كيت تشخيصي كوويدـ19 توليد شده در اين مطالعه 40 كپي در ميلي‌ليتر گزارش شد. با بررسي نمونه‌هاي منفي و مثبت، اختصاصيت و دقت اين كيت 100 درصد بوده، فقط قادر به شناسايي ويروس كوويدـ19 بوده و تكرارپذيري بالا را نشان مي‌دهد. كيت به‌خوبي شوك دمايي را تحمل كرده و داراي پايداري بالايي مي‌باشد. علاوه‌براين، تفاوت معني داري بين كيت توليد شده در اين مطالعه و كيت‌ تجاري خارجي وجود ندارد.نتيجه‌گيري: با توجه به سطح حساسيت، اختصاصيت و هم چنين دقت و پايداري مناسب در مقايسه با كيت‌هاي مشابه، اين كيت مي‌تواند براي تشخيص مؤثر ويروس كوويدـ19 مناسب باشد.