بررسي عملكرد ميكروارگانيسم خاكزي مولد آنزيم ارگانوفسفات هيدرولاز درسم زدايي تركيبات ارگانوفسفره (ديازينون) و ارزيابي خواص كينتيكي آن

تركيبات ارگانوفسفره نظيرديازينون بدليل ويژگيهاي منحصربفردخود بطوروسيعي بعنوان آفت كش وحشره كش دركشاورزي مورداستفاده قرارمي گيرند. آنزيم ارگانوفسفات هيدرولاز(OPH) بطور موثري طيف وسيعي از تركيبات استري ارگانوفسفاتهارا هيدروليز مي نمايد. دراين تحقيق با استفاده ازدو تكنيك غني سازي محيط كشت و حداكثرتكرار دررقت سازي، ميكروارگانيسم تجزيه كننده ديازينون از نمونه هاي تيمار شده باديازينون (مزارع شاليكاري)، جداسازي وباانجام تستهاي مورفولوژيكي وبيوشيميايي شناسايي شد.سپس آنزيم ازسويه باكتريايي استخراج و بترتيب بااستفاده ازرسوب دهي باسولفات آمونيوم وكروماتوگرافي تعويض يوني تخليص گرديد. خلوص آنزيم بااستفاده ازالكتروفورزSDS-PAGE تاييدووزن مولكولي آن نيز توسط ماركرپروتئيني مشخص وخواص كينتيكي آن بررسي گرديد.بااستفاده ازتكنيك غني سازي محيط كشت و افزايش عامل تجزيه زيستي نمونه هاي تيمارشده باديازينون، زمان هيدروليز آنزيمي باكاهش قابل توجهي به كمتراز10ساعت تقليل يافت. متابوليت اصلي حاصل ازهيدروليزآنزيمي ديازينون،-2 ايزو پروپيل--6 متيل-4-هيدروكسي پيريميدين (IMHP) بااستفاده ازدوتكنيك كروماتوگرافي لايه نازك (TLC) و اسپكتروفتومتري شناسايي گرديد. IMHP درمقايسه باديازينونسميت كمتري دارد. آنزيم OPH به ميزان 57.48 مرتبه، بافعاليت ويژه 16.44 واحددر ميليگرم پروتئين ازمحلول عصاره آنزيمي وبازده11.4درصد ووزن مولكولي تقريبيKD40خالص سازي شد. دما وpH بهينه براي ماكزيمم فعاليت آنزيم بترتيب برابر Cͦ 37 و 8.5 بود. علاوه براين غلظت سوبسترا تاM0.05ويونهاي فلزيCa+2, Co+2 به ترتيب 119و106درصد تاثير مثبت برفعاليت آنزيم داشتند. پارامترهاي ثابت ميكائيليس(Km) وحداكثر سرعت آنزيم(Vmax) براي ديازينون بعنوان سوبستراي واكنش بترتيب برابربا Mµ434.2 و Mµ107.3 دردقيقه محاسبه گرديد. نتيجه اينكه آنزيم OPH بافعاليت تدريجي و موثر خود علاوه بر سم زدايي، مي تواند نقشي كليدي درآزادسازي فسفات براي توليدكودزيستي ايفاءكند.