بررسي دو حذف ژني موسوم به لپور و هندي ـ آسيايي در كلاستر ژن بتا گلوبين به صورت PCR دو گانه

بررسي دو حذف ژني موسوم به لپور و هندي ـ آسيايي در كلاستر ژن بتا گلوبين به صورت PCR دو گانه

چكيده سابقه و هدف بتا تالاسمي يكي از شايع‌ترين بيماري‌هاي تك ژني در دنياست. اكثر موتاسيون‌هاي عامل بتا تالاسمي، از نوع نقطه‌اي هستند ولي در بعضي از موارد، موتاسيون‌ها سبب حذف بزرگ در كلاستر ژن بتا گلوبين مي‌شوند. هدف از اين مطالعه، تشخيص و بررسي دو حذف ژني معروف به هندي ـ آسيايي و لپور به شيوه دوپلكس مي‌باشد كه سبب پاسخگويي سريع‌تر به مراجعين و بيماران مي‌‌شود. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تجربي بود. تحقيق بر روي 3 نمونه حذف هندي ـ آسيايي و 10 نمونه لپور انجام شد. در اين تحقيق، بعد از اطمينان از وجود حذف لپور و هندي ـ آسيايي در نمونه‌هاي مورد مطالعه، سعي در تنظيم كردن Gap-PCR مربوط به شناسايي اين دو حذف به صورت دوگانه(duplex) شد. PCR با استفاده از 8 عدد آغازگر در دماي آنيلينگ 68 درجه سانتي‌گراد با غلظت مورد نظر تنظيم شد و با شرايط ايجاد شده، به خوبي اين دو حذف در يك واكنش قابل تشخيص بود. يافته‌ها با توجه به بررسي‌هاي انجام شده با روش Gap PCR ، نتايج ژل‌ها به صورت مولتي‌پلكس نشان داد كه اين دو حذف و باندهاي اختصاصي مربوط به هر حذف، در يك PCR مولتي‌پلكس قابل رديابي است. نتيجه گيري با توجه به اهميـت بررسي به روش مولتي‌پلكس، بررسي حذف‌هاي ژني زنجيره بتا براي دو حذف لپور و هندي ـ آسيايي به صورت هم‌ زمان، سريع، مطمئن و به راحتي قابل انجام است. اين روش با توجه به صرفه‌جويي در وقت و مواد مصرفي به صرفه‌تر مي‌باشد.

Abstract Background and Objectives Beta-thalassemia is one of the most common single-mutation diseases. These mutations cause decreased beta-globin protein synthesis or even deletion. Most of the mutations in beta-globin gene are point mutations but there are some small and big deletions in beta-globin gene cluster. The goal of this research is to detect and study two deletions (Lepore, Asian-Indian) with duplex-PCR. Materials and Methods This study was done on 3 Asian-Indian deletion samples and 10 Lepore samples. After detecting two deletions (Lepore and Asian-Indian), we started setting Gap-PCR in these two known deletions. Duplex-PCR with 8 different primers for detecting Lepore and Asian-Indian deletions simultaneously was set at 68?C annealing temperature; these two deletions can be detected easily in one reaction with this new method. Results The results show that detecting Lepore and Asian-Indian deletions with multiplex PCR is practical, and the specific bands for each deletion are detectable. Conclusions Detecting these two deletions in one reaction (Duplex-PCR) is practical. This method is easy, reliable, and fast; it is also economical and saves both time and money.