تشخيص گونه مايكوپلاسما سينوويه در نمونه هاي باليني با استفاده از روش VlhA-PCR

Detection of Mycoplasma synoviae in clinical samples by VlhA-PCR method

مايكوپلاسما سينوويه به عنوان يكي از اصلي ترين پاتوژن هاي پرندگان، خسارات اقتصادي فراواني را به صنعت مرغداري وارد مي كند. هدف اصلي اين مطالعه شناسايي گونه مايكوپلاسما سينوويه در نمونه هاي باليني با استفاده از روشVlhA-PCRمي باشد. براي بررسي تيتر سرمي، تعداد 375 نمونه سرمي از 25 گله مادر گوشتي اخذ و بر روي آن تست (Rapid Serum Agglutination) RSA انجام گرديد كه 143 نمونه، معادل 19 گله در آزمايش RSA مثبت گرديد. جهت نمونه‌برداري براي (Polymerase Chain Reaction) PCR از 25 گله اي كه 19 گله آن در تست RSA مثبت شده بودند، 20 گله انتخاب و سوآپ هاي استريل از شكاف كامي، ناي، كيسه هوايي و ريه از آنها تهيه گرديد. سه سوآپ از سه پرنده داخل يك لوله آزمايش حاوي يك ميلي ليتر PBS انداخته شد و به آزمايشگاه منتقل گرديد تا براي انجام PCR مورد استفاده قرار گيرد. در اين مطالعه، از پرايمرهاي اختصاصي براي ژن VlhA استفاده شد. محصول PCR توليدي توسط پرايمرهاي اختصاصي، در 8 گله، باند 400-350 جفت بازي را براي همه سويه هاي فيلدي بر روي ژل الكتروفورز تشكيل داد. VlhA-PCR با حساسيت بسيار بالا مي تواند در تشخيص قطعي عفونت با مايكوپلاسما سينوويه در آزمايشگاه به كار برده شود.

As one of the major pathogens of avian species, Mycoplasma Synoviae causes significant economic losses to the poultry industry. The main purpose of this study was to detect Mycoplasma Synoviae in clinical samples using the VlhA-PCR method. For serological screening test, 373 serum samples were collected from 25 breeder farms and rapid serum agglutination test conducted which revealed that 143 samples equivalent to 19 breeder farms were positive. For VlhA-PCR assay, 20 of the previously mentioned breeder farms were selected and sterile swab were collected from the palatine cleft, trachea, air sacs and lungs. Three swabs from 3 birds were placed in a test tube containing 1 ml of PBS and transferred to the laboratory for PCR test. Specific primers for VlhA gene were employed in this study. The PCR product from specific primers showed 350-400 bp for all field isolated on electrophoresis gel in 8 farms. VlhA-PCR with high sensitivity could be employed in definitive diagnosis of Mycoplasma Synoviae infection in the laboratory .