شناسايي پروتيين آنتي‌ژني ديكروسليوم دندريتيكم‌ ‌در گوسفندان آلوده

DETERMINATION OF ANTIGENIC PROTEIN OF DICROCOELIUMDENDRITICUM IN NATURALLY INFECTED SHEEP

ديكروسليازيس يكي از بيماري ‌‌هاي انگلي مهم در دام‌هاست كه توسط ترماتودي بنام ديكروسليوم دندريتيكم‌ ‌ايجاد مي‌شود. تحقيق حاضر با هدف شناسايي آنتي‌ژن تشخيصي در آلودگي طبيعي گوسفند به ديكروسليوم دندريتيكم‌ ‌انجام گرفت. براي تهيه دو نوع آنتي‌ژن بدني و متابوليك، از كرم‌هاي بالغ كه از مجاري صفراوي كبدهاي آلوده جمع‌آوري شده بود استفاده شد. عصاره خام ترماتود بالغ متعاقب هموژنيزاسيون و سانتريفوژ بعنوان آنتي‌ژن بدني تهيه شد. آنتي‌ژن دفعي ترشحي هم با انكوباسيون كرم بالغ در شرايط آزمايشگاهي تهيه گرديد. نمونه ها ابتدا با روش سديم دو دسيل سولفات پلي اكريلاميد ژل الكتروفورزيس ‌(SDS-PAGE)‌ تحت الكتروفورز و شناسايي پروتيين ها قرار گرفت و سپس آنتي‌ژن (هاي) اختصاصي توسط روش وسترن بلاتينگ تعيين هويت شد. بدين منظور آنتي‌ژن‌هاي تهيه شده به كاغذ نيتروسلولز انتقال يافت و سپس با استقرار غشا در بافر مسدود كننده، آنتي‌بادي اوليه و آنتي‌بادي كونژوگه در فواصل زماني مشخص، پروتيين اختصاصي تحت شناسايي قرار گرفت. براي بررسي وجود واكنش متقاطع، آنتي‌ژن‌‌هاي فاسيولا‌ ‌از هر دو نوع بدني و دفعي ترشحي، همچنين آنتي‌ژن كيست هيداتيك و سيستي‌سركوس تنيوكوليس هم آزمايش شد. در ايمونو بلاتينگ آنتي‌ژن هاي بدني و دفعي ترشحي كرم بالغ ديكروسليوم دندريتيكم‌ ‌يك باند با وزن مولكولي 130 كيلودالتون بطور مشترك در هر دو آنتي‌ژن و در آنتي‌ژن دفعي ترشحي علاوه بر وجود اين باند، شش باند پروتييني با وزن مولكولي بين 25 تا 60 كيلودالتون توسط سرم مثبت كوسفندان با آلودگي طبيعي مشخص گرديد. بنابر يافته‌هاي بررسي حاضر، باند پروتييني با وزن مولكولي 130 كيلودالتون بعنوان آنتي‌ژن اختصاصي براي تشخيص ديكروسوليازيس در گوسفند معرفي مي‌شود. ‌ ‌

Dicrocoeliasis is an important livestock disease caused by digenean trematode namely Dicrocoelium dendriticum. The aim of the present study was to identify somatic and metabolic antigens of adult D. dendriticum in naturally infected sheep. Adult parasites collected from the liver of naturally infected sheep, were washed in cold phosphate buffer saline (PBS, pH=7.4) and stored at -20°c until analysis. Antigen used for the detection of antibody included somatic and metabolic of mature trematode. Somatic and excretory-secretory antigens prepared with haemogenization and incubation of adult helminths, respectively. Electrophoretic patterns of excretory secretory and somatic antigens of D.dendriticum were revealed by sodium dodecyl sulphate polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE) and westernblotting using sera from naturally harbored sheep. In western blot analysis of antigens D. dendriticum demonstrate 1 major antigenic polypeptide 130 kDa in both somatic and metabolic antigens and 6 protein bands ranging from 25 to 60 kDa in excretory-secretory antigens which were recognized by serum of sheep naturally infected. Our findings showed that the 130 kDa molecular weight polypeptide could be used as specific antigen for the immunodiagnosis of sheep dicrocoeliasis. Key words: Dicrocoelium dendriticum, Specific antigen, sheep.