تهيه و تخليص آنتي بادي منوكلونال عليه آنتي ژن ليپوآرابينومان مانوزيله مايكوباكتريوم بويس

تهيه و تخليص آنتي بادي منوكلونال عليه آنتي ژن ليپوآرابينومان مانوزيله مايكوباكتريوم بويس

مقدمه و هدف: ليپوآرابينومان مانوزيله (ManLAM) از آنتي ژن‌هاي گليكوليپيدي است كه درصد قابل توجهي از ديواره سلولي باكتري مايكوباكتريوم بويس ب ث ژ را تشكيل مي‌دهد. نظر به اينكه توليد آنتي‌بادي‌ منوكلونال آن، به ويژه در طراحي كيت تشخيص سريع بيماري سل كاربردهايي فراوان دارد، لذا هدف از تحقيق حاضر، توليد آنتي بادي منوكلونال ضد اين آنتي ژن مي‌باشد. مواد و روش كار: پس از تزريق‌هاي منظم موش‌هاي BALB/c با BCG سونيكيت شده، آنتي‌ژن LAM ، تيتر آنتي‌بادي توليدشده بررسي گرديد. لنفوسيت‌هاي طحالي موش ها و سلول هاي ميلوماي Sp2/0 با كمك پلي‌اتيلن‌گليكول امتزاج داده شدند. سلول ها در محيط HAT انتخاب شدند و كلون‌هاي مولد آنتي‌بادي ضد آنتي‌ژن LAM با استفاده از آزمون الايزا شناسايي شدند؛ پس از تخليص آنتي بادي منوكلونال، شناسايي آنتي ژن هاي ليپوآرابينومان مانوزيله و BCG سونيكيت شده با روش وسترن بلاتينگ انجام گرفت. نتايج: تعداد 2 كلون H2-3B9 , H1-3D3 مولدآنتي‌بادي اختصاصي با جذب بالا در آزمايش الايزا، انتخاب شدند. نتايج وسترن بلاتينگ، باند 30 كيلو دالتوني مربوط به آنتي ژن‌هاي ليپوآرابينومان مانوزيله و BCG سونيكيت شده با استفاده از آنتي بادي‌هاي منوكلونال IgM و IgG3 را تاييدمي‌كرد. نتيجه گيري: نتايج نشان داد كه امكان توليد و تخليص آنتي بادي منوكلونال با استفاده از امتزاج لنفوسيت‌هاي B طحال موش هاي ايمن شده و سلول هاي ميلوما وجودداشته، تاييد واكنش اختصاصي آنتي بادي مذكور قبل از انجام مطالعات تشخيصي در شناسايي سريع سل در ادرار بيماران و بررسي‌هاي مصونيت زايي واكسن ب ث ژ مورد توجه خواهدبود.

Background and Objective: Lipoarabinomannan mannesylated (Man-LAm) is one of the lipoglycans which forms a considerable percent of Mycobacterium Bovis BCG’ cellular wall. Considering that generation of monoclonal antibody against Man LAM antigen has many applications, specifically, in order to design the diagnostic kit for rapid diagnosing of tuberculosis, so the main objective of this study was based on production of monoclonal antibody against this antigen. Materials and Methods: The female BALB/c mice were immunized by regular injections of sonicated BCG and LAM antigen, then after each injection, circulation of generated antibodies were investigated. Spleen lymphocytes of immunized mice and SP2/0 myeloma cells were fused into each other. The cells were selected by HAT medium. Identification and selection of anti-LAM antigen producing clones were performed using ELISA test. After purification of anti-ManLAM, detection of ManLAM antigen and sonicated BCG carried out by western blot technique. Results: The two H1-3D3, H2-3B9 clones, producing specified antibody were selected which had higher absorbance in ELISA test. The results of Western blotting showed that 30KDa band was related to sonicated BCG and ManLam antigen, using IgG3 IgM antibodies. Conclusion: The results indicated that using the fusion of hybridoma myeloma cells, it is possible to produce and purify monoclonal antibodies, and before performing diagnostic studies in order to have rapid diagnosing of tuberculosis in patient`s urine, and investigations for immunizing the BCG vaccine, conformation of specified reaction of mentioned antibody will be considered.