استفاده از روش فلوسايتومتري در تعيين ميزان HbF جنيني متعاقب خونريزي جنيني ـ مادري در محيط آزمايشگاهي با دو روش دو رنگي HbF وتك رنگي آنتي‌ژن D

استفاده از روش فلوسايتومتري در تعيين ميزان HbF جنيني متعاقب خونريزي جنيني ـ مادري در محيط آزمايشگاهي با دو روش دو رنگي HbF وتك رنگي آنتي‌ژن D

چكيده سابقه و هدف فلوسايتومتري روشي مناسب، سريع، دقيق و قابل اعتماد جهت ارزيابي ميزان خونريزي‌هاي جنيني ـ مادري (FMH) مي‌باشد. هدف از اين مطالعه، بررسي ميزان FMH با استفاده از شاخص آنتي‌ژنيك RhD وهموگلوبين جنيني(HbF) به روش فلوسايتومتري است. مواد و روش‌ها در يك مطالعه تجربي، 34 نمونه خون بند ناف نوزاد Rh مثبت با خون فرد بالغ RhD منفي به صورت‌رقيق‌سازي سريالي در 6 رقت(125/0، 25/0، 5/0، 1، 5 و 10 درصد) كه بيانگر 9/99 درصد احتمال FMH بود، شبيه‌سازي شد و به روش فلوسايتومتري دو رنگي HbF ‏‏و كربونيك انهيدراز(CA) وتك رنگي RhD مورد مطالعه قرار گرفت. از آزمون‌هاي آماري T test، آناليز واريانس و رگرسيون جهت تحليل نتايج استفاده شد. يافته‌ها همبستگي قابل قبولي بين نتايج HbF و RhD به روش فلوسايتومتري مشاهده شد(897/0 r=). ميزان خونريزي محاسبه شده توسط هر دو پارامترHbF و RhD در مقايسه با مقادير خونريزي مورد انتظار، نشان داد كه آناليز دو رنگي HbF و CA ازحساسيت بالاتري نسبت به آناليز تك رنگي RhD در تعيين مقادير اندك خونريزي برخوردار مي‌باشد. نتايج روش RhD با وجود همبستگي بالا(984/0 r=)، در تعيين مقادير پايين FMH در مقايسه با ميزان خونريزي به دست آمده از روش HbF/CA ، افزايش كاذبي را نشان ‌داد ولي توانايي آن درتعيين مقادير بالاتر خونريزي در مقايسه با HbF/CA قابل توجه بود. نتيجه‌گيري استفاده از مونوكلونال آنتي‌بادي‌هاي اختصاصي در روش فلوسايتومتري، امكان ارزيابي دقيق ميزان خونريزي و به تبع آن تعيين دقيق دوز ايمونوگلبولين Rh جهت محافظت مادران از آلو ايمونيزاسيون بر عليه آنتي ژن D را ايجاد مي‌كند.

Abstract Background and Objectives The quantification of fetal cells in the maternal circulation is an important goal to determine the amount of anti-D for prevention of active immunization of a D-negative mother giving birth to a D-positive baby. The aim of this study was to evaluate two flowcytometric staining technics for determination of fetal erythrocytes in maternal blood and to recognize the best. Materials and Methods In this experimental study, 34 adult D-negative blood samples were spiked with six serial dilutions of D-positive cord blood (0.125, 0.25, 0.5, 1, 5 and 10%) which was representative of 99.9% of the clinical fetomaternal hemorrhage (FMH); they were stained for flow cytometric analysis. The Fetal Cell Count Kit was used for HbF dual staining and monoclonal anti-D for RhD single staining. Results A comparison between RhD and HbF percentages and FMH volume in spiking samples was performed. A significant correlation between two different parameters in flowcytometric percentages was observed (anti-HbF versus anti-D, r= 0.897, p < 0.05). FMH volume was calculated and a significant correlation between expected and observed FMHs in RhD and HbF was obtained (p < 0.05, r=0.984, r=0.874). The anti-HbF flowcytometric dual staining allowed better distinction between fetal RBCs (HbF+,CA-), F cells (HbF+,CA+), and adult RBCs (HbF-,CA+). Although Rh-D showed better correlation, but higher values with the RhD in suspensions lower than 10% were noted. Conclusions Data showed that anti-HbF labeling is significantly much more accurate than RhD labeling. Quantification of FMH using these two techniques described allows precise dosage of RhD immunoglobulin for protection against anti-D allo-immunization.