پديد آورندگان :
عربي، حميد رضا نويسنده , , روحوند، فرزين نويسنده عضو هيات علمي انستيتو پاستور ايران , , نوروزيان، داريوش نويسنده بخش پايلوت بيوتكنولوژي، انستيتو پاستور ايران , , آقا صادقي، محمدرضا نويسنده عضو هيات علمي انستيتو پاستور ايران , , معمار نژاديان، آرش نويسنده عضو هيات علمي انستيتو پاستور ايران , , خان احمد، حسين
نويسنده عضو هيات علمي انستيتو پاستور ايران , , سادات، سيد مهدي نويسنده كارشناس ارشد انستيتو پاستور ايران , , متولي، فاطمه نويسنده انستيتوپاستورايران ,
كليدواژه :
استرپتوكيناز , فعاليت بيولوژيك , پروتئين هاي كوتاه شده , كلونينگ
چكيده فارسي :
استرپتوكيناز پرمصرف ترين دارو در درمان ترومبوليتيك عروق خوني به شمار مي آيد. با وجود اين، به علت غيرانساني بودن منشا آن و فعاليت غيراختصاصي در غياب فيبرين، كاربرد آن با عوارض آلرژيك و ضايعات هموراژيك همراه مي باشد. اثبات شده است كه انواع كوتاه شده اي از استرپتوكيناز، درحالي كه بيشترين فعاليت خود را حفظ كرده اند اختصاصيت بيشتري نسبت به فيبرين پيدا كرده و فاقد برخي نواحي آنتي ژنيك خود هستند. در اين پژوهش استرپتوكينازهاي كوتاه شده SKc143-386 و SKc60-386 به همراه استرپتوكيناز كامل در دو وكتور بياني pQE30 و pET41a كلون شدند. در حالي كه، استرپتوكيناز كامل در هر دو نوع وكتور بيان شد، pET41a تنها وكتور موثر در توليد انواع كوتاه شده استرپتوكيناز بود. pET41a داراي سه برچسب قبل از جايگاه آنزيمي خود مي باشد كه احتمالا" از بروز مشكلاتي همچون بيان ژن هاي هترولوگ نوتركيب در اشريشياكلي جلوگيري مي كند. بررسي SDS-PAGE و وسترن بلات پروتيين هاي تخليص شده، درست بودن اندازه و ماهيت پروتيين هاي توليد شده را نشان داد. بررسي فعاليت اختصاصي پروتيين هاي SK143-386، SK60-386 و استرپتوكيناز كامل با استفاده از روش دقيق رنگ سنجي نشان دهنده كاهش 83 تا 91 درصدي در فعاليت انواع كوتاه شده بود. اين پژوهش، مطالعه اوليه اي براي مقايسه فعاليت اختصاصي پروتيين هاي كوتاه شده و دست نخورده استرپتوكيناز توليد شده مي باشد. براي بررسي اختصاصيت به فيبرين و همچنين ميزان آنتي ژنيسيته نياز به آزمون هاي بيشتر مي باشد.
