بررسي نقش سويه‌هاي تيپيك اشريشيا كلي انتروآگره گيتيو (tEAEC) در اسهال كودكان

زمينه و هدف: سويه‌هاي اشريشياكلي انترواگره گيتيو عامل ايجاد اسهال حاد و مزمن و اسهال پايدار در كودكان مي‌باشند. اين سويه‌ها داراي الگوي چسبندگي اختصاصي اگره گيتيو (stacked brick) به سلول‌هاي اپيتليالي مانند HeLa و HEp-2 هستند. استفاده از تكنيك PCR بر اساس حضور ژنهاي مرتبط با ويرولانس، تشخيص سويه‌هاي EAEC را تسهيل مي‌نمايد. هدف از انجام اين مطالعه ارزيابي روش PCR ژن pCVD432 جهت شناسايي سويه‌هاي EAEC و وجود ژنهاي ويرولانسastA, aap, aafA, aggA, aggR جهت افتراق سويه‌هاي تيپيك و آتيپيك EAEC مي‌باشد. روش بررسي: در اين تحقيق 140 نمونه مدفوع جمع‌آوري شده از كودكان زير 12 سال داراي اسهال مراجعه‌كننده به بيمارستان بعثت همدان در سال 87-86 مورد برسي قرار گرفتند. بعد از تلقيح نمونه‌ها به محيط مكانكي آگار در دماي 37 درجه سانتي‌گراد بمدت 18 ساعت انكوبه گرديدند. بعد از شناسايي كلني‌هاي اشريشياكلي با تستهاي بيوشيميايي، ابتدا با استفاده از پرايمر pCVD432 كه اختصاصي سويه‌هاي EAEC است، سويه‌هاي EAEC شناسايي و پس از آن فاكتورهاي ويرولانس آنها با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي ژن‌هاي ويرولانس aggR ، aggA ، aafA ، aaP و astA مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته‌ها: از 140 بيمار مبتلا به اسهال 15(8/10%) سويه اشريشيا كلي داراي ژن pCVD432 ايزوله گرديد. ژن aggR در 11(3/73%) سويه شناسايي گرديد. ژنهاي aggA و aafA به ترتيب در 3 و 4 ايزوله وجود داشت. ژن aap در 9 سويه و ژن astA در 7 سويه مثبت گزارش گرديد. چندين تركيب مختلف از شاخص‌هاي ژنتيكي در بين سويه‌هاي EAEC مشاهده شد و مشخص گرديد كه شايعترين الگوهاي ژنومي aggR-aap با 3/53% وaggR-aafA با 7/26% بودند. نتيجه‌گيري: نتايج اين مطالعه نشان مي‌دهد كه در اين منطقه سويه‌هاي EAEC يكي از شايعترين پاتوژنهاي روده‌اي محسوب مي‌گردند. PCR ژن pCVD432 بعنوان معمول‌ترين هدف جهت شناسايي مولكولي اين سويه‌ها مي‌باشد. سويه‌هاي تيپيكال EAEC با دارا بودن ژن aggR شيوع بالايي در سويه‌هاي ايزوله شده دراين منطقه را نشان داده‌اند و با توجه به الگوي فاكتورهاي ويرولانس داراي هتروژني هستند.

Background and Aim: Enteroaggregative Escherichia coli (EAEC) strains have been implicated as causative agents of acute, chronic and persistent diarrhea in children. EAEC have special aggregative adherence pattern for HEp-2 or HeLa cells. PCR methods based on the presence of essential virulence factors would facilitate the diagnosis of EAEC strains. The aim of this study was to assess the usefulness of the PCR assay targeting the pCVD432gene for the detection of EAEC strains and the presence of aggR, agg, aafA, aap and astA genes which can be used for the differentiation of typical and atypical EAEC strains. Materials and Methods: One hundred and forty faecal samples were collected from children of less than 12 years of age with diarrhea at the Besat Hospital, in Hamadan, between July 2007 and May 2008. The faecal samples were plated onto MacConkey agar and incubated at 37 oC for 18 hours. E.coli colonies were identified by biochemical tests. EAEC strains were identified by ues of pCVD432 primer which is specific for EAEC strains. Then their virulence factors were evaluated by use of specific primers of aggR, aggA, aafA, aap and astA genes. Results: Strains of E. coli harboring the pCVD432 gene were found in the faecal samples from 15 (10.8%) patients. The aggR gene was present in 11(73.3) strains. The aggA gene was found in 3 isolates and 4 strains had the aafA gene. The aap and astA genes were found in 9 and 7 strains, respectively. Several different combinations of the genetic markers were found among the EAEC strains. The most prevalent combinations were aggR/aap, found in 8 (53.3%) and aggR/aafA detected in 4(26.7%) strains. Conclusions: The results of this study showed that EAEC strains were one of the most prevalent enteric pathogens in children in this region. The pCVD432 gene PCR assay is the most common method for detection of EAEC strains. Typical EAEC strains with aggR gene had a high prevalence in this region and considering the pattern of virulence factors, they were heterogenous.