تشخيص و تفريق اوليه تعدادي از جدايه‌هاي مايكوپلاسما سينوويه ايران به روش PCR براساس تكثير بخشي از ناحيه انتهايي 5‌ژن VlhA

تشخيص و تفريق اوليه تعدادي از جدايه‌هاي مايكوپلاسما سينوويه ايران به روش PCR براساس تكثير بخشي از ناحيه انتهايي 5‌ژن VlhA

مايكوپلاسما سينوويه بعنوان يك عامل بيماريزاي دخيل در عوارض تنفسي و لنگش، خسارات اقتصادي قابل توجهي را متوجه صنعت طيور در ايران مي‌سازد. لذا تشخيص سريع وقطعي آلودگي و نيز تفريق سويه‌ها از ابزارهاي كليدي در پيشگيري و كنترل مي‌باشد. هدف از اين مطالعه جداسازي ميكروارگانيزم و تشخيص، شناسايي و نيز تفريق سويه‌هاي رايج درايران بويژه سويه‌هاي فيلد و واكسن به‌روش مولكولي بود. از 11 مرغداري در مناطق مختلف كشور هركدام تعداد 20 نمونه خون جهت آزمايش تست سريع آگلوتيناسيون و الايزا‚10 نمونه سواب ناي وشكاف كامي وبافت بمنظور كشت و نيز 9 نمونه سوا ب جهت آزمايش ‌ PCR اخذ گرديد. بمنظور تشخيص اين ميكروارگانيزم بروش مولكولي ،علاوه بر پرايمرهاي srRNA16،براي اولين بار در كشور ازجفت پرايمر مربوط به انتهاي آميني ژن VlhA استفاده گرديد. نتايج حاصله از روش PCR با استفاده از جفت پرايمر اخير نشان داد كه علاوه بر امكان شناسايي گونه مايكوپلاسما سينوويه در مورد نمونه‌هاي مورد آزمايش، اندازه محصول PCR بدست آمده در سويه‌هاي مختلف شامل جدايه‌هاي بدست آمده، سويه استاندارد و سويه واكسن بين 350 تا400 جفت باز متفاوت بود. مقايسه نتايج اين روش با روشهاي سرولوژي و جداسازي و نيز روش PCR معمول با استفاده از پرايمرهاي مربوط به ژن srRNA16 از يكسو و نيز اختلاف اندازه در باندهاي ايجاد شده در سويه‌هاي مختلف از سوي ديگر دلالت بر آن دارد كه روش PCR با استفاده از پرايمرهاي مربوط به ژن vlhA مي‌تواند در مورد نمونه‌هاي باليني بعنوان يك روش با حساسيت و ويژگي بالا جهت تشخيص گونه مايكوپلاسما سينوويه و نيز تفريق اوليه سويه‌ها اعم از واكسن يا سويه فيلد مطرح باشد

Mycoplasma synoviae, (MS) as a pathogen involving in respiratory and locomotor disorders, causes many economic losses on poultry industry in Iran. Therefore, early and reliable diagnosis and also strain differentiation is a key to prevention and control. The aim of this study was the isolation, detection, and differentiation of Iranian isolates especially field and vaccine strains using PCR. Eleven serologically positive flocks from different parts of country were selected. From each flock, 20 blood samples were provided for serum plate agglutination test and ELISA; 10 swabs were taken from trachea, cleft palate, and tissues for MS isolation; and 9 swabs were collected for PCR identification. For the first time in Iran, the primers complementary to the single-copy conserved 5ʹ end of vlhA gene were used for detection of MS by PCR. Results obtained from serology, isolation, and PCR using primers related to 16s rRNA and vlhA genes were analyzed and compared. PCR results, in addition to identification of Mycoplasma species, revealed variable sizes of 350-400 bp among standard strain, vaccine strains, and Iranian field isolates. The findings of this study demonstrated that the vlhA gene-targeted PCR is a sensitive and specific test for detection of M. synoviae, and an efficient tool for primary typing of its different strains