بررسي جهش‌هاي ژن بتا گلوبين در بيماران تالاسمي با استفاده از روش PCR-SSCP

بررسي جهش‌هاي ژن بتا گلوبين در بيماران تالاسمي با استفاده از روش PCR-SSCP

زمينه و هدف: بتا تالاسمي يكي از شايع ترين بيماري هاي ژنتيكي در ايران است و بيش از دو ميليون حامل بتا تالاسمي در ايران وجود دارد. شناسايي جهش‌هاي ژن بتاگلوبين براي برنامه‌هاي تشخيصي و مديريتي معين مانند تشخيص پيش از زايمان بيماري بتاتالاسمي ضروري است. در كشور ما روش PCR-ARMS(PCR-amplification refractory mutation system) بطور گسترده براي شناسايي جهش‌هاي ژن بتا گلوبين استفاده مي‌شود. روش بررسي: در اين مطالعه كاربرد روش PCR-SSCP (PCR-single strand conformation polymorphism) در شناسايي جهش‌هاي بتا تالاسمي توضيح داده مي‌شود. در بيماراني كه جهش‌هاي آنها قبلاً با توالي يابي تاييد شده بودند، حدود 281 جفت باز حاوي اگزون يك ژن بتا گلوبين با روش PCR تكثير گرديد. 5/2 ميكروليتر محصول واكنش PCRرا مطابق تكنيك SSCP در ژل اكريل آميد الكتروفورز و باندها با رنگ‌آميزي نيترات نقره آشكار شدند. هفت جهش و يك پلي‌مورفيسم با اين تكنيك بررسي شد. يافته‌ها: مشخص گرديد الگوي حركت تك رشته‌اي‌ها كاملاً متفاوت با همديگر و با نمونه كنترل بود. نتيجه‌گيري: تكنيك PCR-SSCP مي‌تواند نياز ما را براي توالي يابي مستقيم DNA ژنومي كاهش داده و در كشورهاي در حال توسعه كه بيماريهاي هموگلوبيني ژنتيكي بالا و منابع مالي كم است مفيد باشد.

Background and Aim: ?-thalassemia (?-thal) is one of the most prevalent hereditary diseases in Iran. There are more than two million carriers of ?-thal in Iran. Detection of the beta globin gene mutations is necessary for a definitive diagnostic and management plan such as prenatal diagnosis of ?-thalassemia. In our country, the PCR-Amplification Refractory Mutation System (PCR-ARMS) has been frequently used for detection of beta globin gene mutations. Material and Methods: Here, we used the PCR-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) assay for detection of mutations of beta globin gene. In the patients with confirmed mutations, we amplified 281base pairs containing exon of one of a beta globin gene by PCR. Based on SSCP technique 2.5 µl of the reaction products appeared in polyacryamide gel electrophoresis and the bands were visualized by silver staining. Seven mutations and one polymorphism were evaluated by PCR-SSCP assay. Results: The results of this study demonstrated that the patterns of mobility of single strands were different from each other and those of control sample. Conclusion: Our study showed the PCR-SSCP technique can meet the need for direct genomic sequencing of DNA and could be applied in the developing countries where financial resources are limited but genetic hemoglobin disorders are highly prevalent.