بيان كپسول در باكتري اشرشياكلي نيازمند پروتيين KfiB است: يك مطالعه مبتني بر آناليز ساختار و عملكرد

Expression of E.coli capsular polysaccharide requires the KfiB protein: A Structural based analysis

چكيده زمينه و هدف: بيان كپسول يكي از عوامل مهم بيماريزايي باكـتريهاي مـهاجـم بوده، در انسان داراي اهـميـت است . اشرشــياكلي با داشــتـن شـرايط ويـژه به عـنوان يك سيـستم مدل مـناسـب براي مطالعه مكانيسمهاي توليد و ارسـال كـپسـول پـلي سـاكاريــدي به سـطوح غـشـايـي قـابل اسـتفـاده مـي بـاشد . توليد كپسول پـلـي سـاكـاريـدي در اشـرشـياكـلي به چـهـار نـوع پـروتــيـين KfiA ، KfiB ، KfiC ، KfiD نــيـازمــند مي بـاشد كـه در ايــجـاد سـاخــتـارهـاي تـكـراري 4) GLcA - B(1,4) – GlcNAc-?(1- -سازنده كپسول، ايفاي نقش مي كنند . تا كنـون نقـش سـه نوع از چـهـار پروتـييـن فــوق مـشـخـص شده است اما هنوز نقش KfiB ناشناخته مانده است . روش بررسي: به منـظور يافتن نقش پروتيين KfiB ، در اين مطالعه چندين ساختار متفاوت بيان كننده بخشهاي مختلف ايـن پروتيـين (pMA2-6) و يــك ساخـتار كـامـل از آن (pMA1) كـه هـمـگي در انتهاي آمين خود قطـعه ي 6His-tag داشتـند ساخـته شد . حضور اين قطعه به تخـلـيص پروتيينـهاي توليد شده با استفاده از ستون كروماتوگرافي -NTA+Ni2 كمك مي كند . يافته ها : هيچ كدام از پلاسـميد هاي ساختـه شده به اسـتثـناي pMA1 قادر به جبـران نقش KfiB در پلاسميد جـهش يافته pPC6::23 نبوده و نتوانستند توانايي توليد كـپسول را مجدداً به باكتـري بازگردانند. از طرفـي ايـن تــوانـايـي بـا pMA1 نـشـان دهـنـده ايـن بـود كه حـضـور قــطـعه His-tag متـصــل بـه ايـن پـروتيـين مزاحمتي در عملكرد آن نـداشـته ضـمـن ايـن كه حـتـماً به قــطـعه كـامـل پـروتيـين KfiB بـراي تـكميل (Complementation) كمپلكس نياز مي باشد . نتيجه گيري: مطالعات مرتبط با يافتن محل تجمع(اتصال)اين پروتيين نشان داد كه پروتيين KfiB به غشاي سيتوپلاسمي متصل مي شود . واژه هاي كليدي: اشرشياكلي، كپسول پلي ساكاريدي، KfiB، K5