تشخيص سويه‌هاي كلبسيلا پنومونيه توليد كننده آنزيم AAC(6ʹʹ)-Ib وAAC(3)-IIa جدا شده از بيمارستان‌هاي شهر تهران با PCR

Detection of AAC(6ʹʹ)-Ib and AAC(3)-IIa producing Klebsiella pneumoniae isolated from Tehran Hospitals by PCR

آمينوگليكوزيدها به طور وسيعي در درمان عفونت‌هاي ايجاد شده توسط كلبسيلا پنومونيه مورد استفاده قرار مي‌گيرند. مكانيسم مقاومت به آمينوگليكوزيدها ناشي از توليد آنزيم‌هاي تغيير دهنده دارو مانند آمينوگليكوزيد استيل ترانسفراز (AAC) مي‌باشد. هدف از اين بررسي تعيين فراواني كلبسيلا پنومونيه توليد كننده آنزيم AAC(6ʹ)-Ib وAAC(3)-IIa در سويه‌هاي مقاوم به آمينوگليكوزيد توسط PCR بود.تعداد 200 سويه كلبسيلا پنومونيه از نمونه‌هاي مختلف كلينيكي از پنج بيمارستان شهر تهران جمع آوري و سپس توسط تست‌هاي بيوشيميايي مورد تاييد قرار گرفتند. حساسيت آنتي بيوتيكي سويه‌ها با روش انتشار ديسك طبق توصيه CLSI نسبت به12 آنتي بيوتيك تعيين گرديد. حضور ژن‌هاي aac(3)-IIa و aac(6ʹ)-Ib در سويه‌هاي مقاوم به آمينوگليكوزيدهاي آميكاسين، جنتاميسين و توبراميسين با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي توسط PCR شناسايي شد.ميزان مقاومت دارويي نسبت به آنتي بيوتيك‌هاي آموكسي سيلين (‌89 %)، كوتريموكسازول (5/39 %)‌، سفتازيديم (5/35 %)‌، سفوتاكسيم (5/34 %)‌، سيپروفلوكسازين (5/9 %) و ايمي پنم (5 /0%)، جنتامايسين (36 %)‌، آميكاسين (27 %) و توبرامايسين (24 %) به دست آمد. در 105 سويه مقاوم به آمينوگليكوزيدها، حضور ژن aac(3)-IIa و aac(6ʹ)-Ib با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي توسط PCR شناسايي شد.ژن aac(6ʹ)-Ib در 8/43 % از سويه‌ها و ژن aac(3)-IIa در 2/34 % از سو يه‌هاي مقاوم از نظر فنوتيپي وجود داشت .نتايج نشان مي‌دهد كه توليد آنزيم آمينوگليكوزيد استيل ترانسفرازAAC(6ʹ)-Ib) وAAC(3)-IIa‌) در سويه‌هاي مقاوم به آمينوگليكوزيد كلبسيلا پنومونيه بالاست، بنابراين اقدامات مناسب جهت كنترل و كاهش ميزان مقاومت ضروري به نظر مي‌رسد.

Aminoglycosides are widely used to treat infections caused by Klebsiella pneumoniae. The Aminoglycoside resistant mechanism is involving production of aminoglycoside modifying enzymes such as aminoglycoside acetyltransferases (ACC). The aim of this study was to determine frequency of AAC(6ʹ) -Ib and AAC(3)-IIa enzyme producing Klebsiella pneumoniae in Aminoglycoside resistant strains by PCR.The total of 200 clinical isolates of Klebsiella pneumoniae was collected from clinical specimens from five hospitals in Tehran, and confirmed by conventional methods. Antibiotic susceptibility was determined by disk diffusion method as recommended by CLSI with regard to 9 antibiotics. PCR was made by specific primers for aac(3)-IIa and aac(6ʹ)-Ib gene in Gentamicin, Amikacin and Tobramycin resistant strains .Klebsiella pneumoniae isolates were resistant to Amikacin (27%), Gentamicin (36%), Tobramycin (24%), Amoxicillin (89.5%), Ciprofloxacin (9,5%), Ceftazidime (35.5%), Cefotaxime (34.5%)co-trimoxazol( 39.5%),Imipenem(0.5%) . In 105 Aminoglycoside resistant strains, aac(3)-IIa and aac(6ʹ)-Ib gene was found by specific primers by PCR. Of the 105 Aminoglycoside resistant isolates included in this study, 43.8% of resistant isolates were PCR positive for aac(3)-IIa and 34.2% resistant isolates were PCR positive for aac(6ʹ)-Ib gene.The results indicated that high percentage of Aminoglycoside resistant Klebsiella pneumoniae produced aminoglycoside acetyltransferases AAC(6ʹ)-Ib and AAC(3)-IIa enzymes. Thus, appropriate policies should be implied for control and decrease of antibiotic resistance.