اثر برخي از دترجنت‌ها و عوامل پايداركننده بر فعاليت آنزيم فسفاتيدات فسفوهيدرولاز غشايي (PAP2) كبد موش صحرايي

The effect of some detergents and stabilizing agents on plasma membrane phosphatidate phosphohydrolase of rat liver

زمينه: آنزيم فسفاتيدات فسفوهيدرولاز(PAP) تبديل اسيد فسفاتيديك به دي‌آسيل گليسرول و فسفات معدني (Pi) را كاتاليز مي‌كند. دو فرم مختلف از آنزيم PAP درسلول‌هاي كبدي موش صحرايي گزارش شده است، يكي PAP1 كه در متابوليسم فسفوليپيدها وگليسروليپيدها دخالت دارد و شكل ديگر PAP2كه در پديده Signal transduction نقش دارد. متعاقباً اثبات شد PAP2 داراي دو ايزوفرم PAP2a و PAP2b مي‌باشد. هدف از اين مطالعه بررسي اثر عوامل دترجنتي تويين 80 ، لوبرول PX ، CTAB و غيردترجنتي سوكروز، تره‌هالوز و آلبومين بر پايداري وفعاليت PAP2b مي‌باشد. روش‌ها: تعداد 14 سر موش‌هاي صحرايي نر از نژاد Wistar و در محدوده وزني 250-200 گرمي مورد استفاده قرارگرفت. PAP2b از غشاي سلول‌هاي كبدي موش صحرايي با استفاده از n- اكتيل گلوكوزيد محلول‌سازي و طي چندين مرحله كروماتوگرافي تخليص گرديد. SDS پلي اكريل آميد ژل الكتروفورز براي تعيين درجه خلوص، تعداد و وزن زيرواحدهاي آنزيمي در ژل 10درصد به‌صورت ناپيوسته انجام گرفت. اثرسوكروز، تره‌هالوز و آلبومين برفعاليت PAP2b در غلظت‌هاي مختلف بررسي شد. يافته‌ها: PAP2b تخليص‌شده، فعاليت ويژه‌اي معادل mU/mg protein7350 داشت . الكتروفورز PAP2b تخليص‌شده در حضور SDS يك نوار با وزن مولكولي 8/33 كيلو دالتون نشان داد. فعاليت آنزيم PAP2b با لوبرول PX و تويين 80 در غلظت mM3 تقريباً 3 برابر تحريك گرديد و با CTAB در غلظت mM4-1 برابر تحريك شد. تره‌هالوز، سوكروز و آلبومين به‌ترتيب در غلظت‌هاي 3، 7 و 10 درصد در محيط سنجش بيشترين اثر پايداركنندگي را براي آنزيم داشتند. نتيجه‌گيري: دترجنت‌هاي تويين 80 ، لوبرول PX و CTAB نيز قادر به تحريك فعاليت آنزيم PAP2b هستند. در صورت نياز به پايدار نمودن آنزيم PAP2b به‌وسيله عوامل غيردترجنتي، استفاده از تره‌هالوز بهتر از سوكروز و آلبومين است. دترجنت غيريوني لوبرول PX نسبت به ساير دترجنت‌هاي يوني و غير يوني توانايي بيشتري در فعال‌سازي آنزيم PAP2b نشان مي‌دهد.