شناسايي گونه‌هاي مهاجم جنس Trichoderma از بسترهاي پرورش قارچ خوراكي دكمه‌اي (Agaricus bisporus) با استفاده از رو‌ش‌هاي مورفولوژيكي و مولكولي

Identification of aggressive species of Trichoderma from button mushroom farms (Agaricus bisporus) using morphological and molecular methods

گونه‌هاي مختلف جنسTrichoderma بويژه گونه T. harzianum و بيوتيپ‌هاي Th2 در اروپا و در آمريكا Th4 به عنوان عامل مولد ايجاد بيماري كپك سبز در بسترهاي پرورش قارچ خوراكي دكمه‌اي (Agaricus bisporus) محسوب مي‌شوند. در اين تحقيق، 100جدايه از مراكز مختلف پرورش قارچ خوراكي دكمه‌اي در استان تهران و شهرستان اروميه جمع‌آوري، جداسازي و خالص شدند. با استفاده از كليد‌هاي شناسايي معتبر، 60 جدايه از گونه T. harzianum، 27 جدايه از گونه T. virens، هفت جدايه از گونه T. hamatum و شش جدايه از گونه T. inhamatum شناسايي شدند. عامل اصلي آلودگي بسترهاي پرورش قارچ خوراكي گونه T. harzianum تشخيص داده شد. براي تشخيص دقيق‌تر عامل بيماري، از آغازگرهاي اختصاصي جهت شناسايي بيوتيپ‌هاي مربوط به گونه عامل بيماري استفاده شد. آغازگرهاي اختصاصي براي شناسايي بيوتيپ‌هايTh2 و Th4 قادر به تكثير قطعه 450 جفت بازي بودند. با استفاده از اين آغازگر، از ميان 60 جدايه مربوط به گونه T. harzianum، تعداد 30 جدايه از بيوتيپ‌هاي Th2 و Th4 موسوم به T. aggressivum f. aggressivum و T. aggressivum f. europeaum شناسايي شدند. همچنين براي تعيين دماي بهينه رشد گونه بيمارگر، سرعت رشد پرگنه 60 جدايه در دماهاي 15، 20، 25، 30 و 35 درجه سلسيوس مورد بررسي قرار گرفت و مشخص شد كه دماي بهينه رشد براي جدايه‌هاي استان تهران 30 درجه سلسيوس و براي جدايه‌هاي شهرستان اروميه 2±22 درجه سلسيوس بود.

Different species of Trichoderma especially T. harzianum (Th2 biotype in Europe and Th4 in America) considered as causal agent of green mould disease on button mushroom (Agaricus bisporus) casing beds. In this study, 100 fungal isolates were collected and purified from different mushroom growing units in Tehran province and Urmia (NW Iran). Totally, 60 isolates of T. harzianum, 27 isolates of T. virens, seven isolates of T. hamatum and six isolates of T. inhamatum were morphologically identified. The main infectious agent was T. harzianum. Specific primers were used for identification of different biotypes. Th2 and Th4 biotypes specific primers amplified 450bp fragment. Using these primers, 30 isolates of Th2 and Th4 biotypes called T. aggressivum f. aggressivum and T. aggressivum f. europeaum were identified from 60 isolates of T. harzianum. Colony growing rates of 60 fungal isolates were measured at 15, 20, 25, 30 and 35? C for determination of optimum growth temperature. These optimum temperatures for Tehran and Urmia isolates were 30? C and 22±2? C, respectively.