عنوان فرعي :
Production of Transgenic Goats, Carrying Human Coagulation Factor IX cDNA, by Nuclear Transfer of Transfected Fetal Fibroblasts
پديد آورندگان :
دالمن، اعظم نويسنده , , اميري يكتا، امير نويسنده پژوهشگاه رويان Amiri Yekta , Amir , صنعتي، محمد حسين نويسنده پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري Sanati, Mohammad Hossein , افتخاري يزدي، پوپك نويسنده پژوهشگاه رويان Eftekhari-Yazdi, Poopak , شاهوردي، عبدالحسين نويسنده پژوهشگاه رويان Shahverdi, AbdolHossein , دانش زاده، محمد تقي نويسنده پژوهشگاه رويان Daneshzadeh, Mohammad Taghi , وجگاني، مهدي نويسنده , , زمردي پور، عليرضا نويسنده پژوهشگاه رويان Zomorodipour, Alireza , فاخري، رحمان نويسنده پژوهشكده رويان- مركز تحقيقات پزشكي توليد مثل- گروه جنين شناسي- تهران- ايران , , وزيري نسب، حامد نويسنده پژوهشگاه رويان Vazirinasab, Hamed , فاطمي، نير السادات نويسنده پژوهشگاه رويان Fatemi, Nayyeralsadat , وهابي، زينب نويسنده پژوهشگاه رويان Vahabi, Zeinab , مسعودي، نجمه السادات نويسنده پژوهشگاه رويان Masoudi , najmehsadat , رضا زاده ولوجردي، مجتبي نويسنده پژوهشگاه رويان Rezazadeh, Valojerdi Mojtaba , گورابي، حميد نويسنده پژوهشگاه رويان Gourabi, Hamid
كليدواژه :
انتقال هسته سلول سوماتيك , انعقادي , تراريخته , فاكتورIX , فيبروبلاست , بز
چكيده فارسي :
تعداد بي شماري از پروتئين هاي نوتركيب وجود دارند كه در شير بيان مي شوند. در اين راستا مي توان ژن مورد نظر را به منظور بيان در شير يك حيوان مزرعه اي تحت كنترل عناصر تنظيمي قرار داد. انتقال هسته با استفاده از سلولهاي ترانسفكت شده، ابزار كارآيي براي توليد حيوانات تراريخته است. در اين مطالعه به منظور توليد بز تراريخته با توانايي ترشح فاكتور IX انعقادي انساني نوتركيب (rhcfIX) در شير، سازه ژني(pBC1-hfIX) با قرارگيري cDNA ژن مذكور بعد از پروموتور بتا- كازئين ساخته شد. سپس سلولهاي فيبروبلاست جنيني بز توسط pBC1-hfIX ترانسفكت شدند. سلولهاي فيبروبلاست از جنينهاي 35 تا 40 روزه بز تهيه گرديد. سپس كلونهاي مثبت (سلولهاي فيبروبلاست حاوي سازه ژني) انتخاب شده و توسط PCR تأييد شدند. به سلولهاي فيبروبلاست جنيني ترانسفكت شده اجازه داده شد كه پس از رسيدن به مرحله تراكم سلولي، به مدت 72 ساعت در همان محيط DMEM حاوي 15 در صد سرم كشت شده تا در مرحله G0/G1 سيكل سلولي هم زمان شوند. تخمكهاي نابالغ از تخمدان هاي كشتارگاهي به دست آمدند و قبل از بي هسته سازي و انتقال هسته بالغ شدند. تخمكهاي بازسازي شده با سلولهاي دهنده، فيوژشده و فعال سازي آنها با استفاده از يونومايسين و 6DMAP انجام شد. جنينهاي بازسازي شده به پذيرنده هاي هم زمان شده منتقل شدند. 64 جنين حاصل از سلولهاي فيبروبلاست جنيني ترانسفكت شده به 12پذيرنده انتقال يافتند. در دو مورد از پذيرنده ها (16.6 درصد) بارداري در روز 42 توسط سونوگرافي تأييد شد. يكي از بارداريها منجر به تولد دو بزغاله سالم گرديد. حضور ژن فاكتور IX انعقادي انساني در بزغاله ها با استفاده از واكنش PCR وsequencing تأييد گرديد. اين نتايج نشان مي دهد كه سلولهاي فيبروبلاست جنيني بز حاوي ژن فاكتور IX مي توانند تكوين طبيعي جنين را پس از انتقال هسته تا مرحله ترم پيش برند. اين اولين تولد زنده حيوان تراريخته در ايران است.
