بررسي نقش مايع مغزي نخاعي جنين رت در تمايز و تكوين سلول هاي عصبي از رده سلولي pheochromocytoma (سلول هاي PC12)

سابقه و هدف: مايع مغزي- نخاعي(CSF) حاوي فاكتورهاي رشد و نوروتروفيك متعددي مي باشد كه آن را به عنوان عامل تنظيم كننده neurogenesis و تكثير سلولي مطرح مي سازد. سلول هاي PC12 كه به عنوان مدل تمايز نوروني در invitro استفاده مي گردند، در پاسخ به NGF، FGF، EGF و GDNF به نورون هاي شبه سمپاتيك تمايزمي يابند. روش بررسي: CSF از ناحيه Cisterna magna جنين هاي rat (بين روزهاي 17 تا 20) گرفته شد. سلول هاي PC12 در محيط RPM-1640 با FBS 10 درصد كشت شدند. توانايي حيات و تكثير سلولي توسط تست MTT اندازه گيري شد. بيان ماركرهاي تمايز عصبي (MAP-2 و B-III tubulin) توسط ايمونوسيتوشيمي بررسي شد. يافته ها: پروتيين هايMAP-2 و B-III tubulinدر گروه هاي حاويCSF جنينيE17 وE19 بيان شدند، در حالي كه در گروه كنترل بيان نشدند. توانايي حيات و تكثير سلولي به طور معني داري در سلول هاي كشت شده در محيط حاوي CSFجنيني E18 در مقايسه با سلول هاي محيط كنترل افزايش يافت. نتيجه گيري: نتايج اين تحقيق در راستاي مطالعات قبلي مي باشد كه نقش فاكتورهاي نوروتروفيك CSF را در تمايز نوروني آشكار مي سازد. ما در اين تحقيق، تمايزعصبي سلول هاي PC12 به القاي CSF را به محتواي آن به ويژه فاكتورهاي رشد آن نسبت مي دهيم.

Background: Fetal cerebro- spinal fluid (CSF) contains many neurotrophic and growth factors. Rat pheochromocytoma PC12 cells have been widely used as an in vitro model of neuronal differentiation that undergo differentiation to sympathetic neuron-like cells in response to NGF, bFGF, EGF and GDNF. Materials and methods: CSF was removed by tapping the cisterna magna of Wistar rat fetuses (E17- E20). PC12 cells were cultured in RPMI plus 10% FBS. The cell viability and cell proliferation were measured by MTT assay. Neural differentiation markers (MAP-2 and B-III tubulin) expressions were analyzed by immunocytochemistry. Results: MAP-2 and B-III tuobulin were expressed in PC12 cells cultured in CSF supplemented medium, but not in the cells from control cultures. Viability and cell proliferation were significantly elevated in PC12 cells cultured in CSF supplemented medium in E18 compared with control ones. A significant neuronal-like outgrowth appeared as early as Day 3 after the application of the CSF supplemented medium E17 and E19. Conclusion: Our data are in the same line with pervious studies that clarify crucial role of CSF neurotrophic factors in neuronal differentiation. Taken together we address PC12 neuronal differentiation to CSF induction by its components especially growth factors.