پديد آورندگان :
قوام مصطفوي، پرگل نويسنده دانشگاه آزاد اسلامي واحد علوم و تحقيقات تهران Ghavam Mostafavi, pargol , هوشمند، سيد مسعود نويسنده استاديار پژوهشگاه ملي مهندسي ژنتيك و زيست فناوري hoshmand, seyedmasoud , وثوقي، غلامحسين نويسنده استاد گروه بيولوژي دريا، دانشگاه آزاد اسلامي، واحد علوم و تحقيقات تهران vosoughi, Gholamhosein , فاطمي، سيدمحمدرضا نويسنده استاديارگروه بيولوژي دريا، دانشگاه آزاد اسلامي، واحد علوم و تحقيقات تهران fatemi, mohammad reza , عطايي طالبي، مهبا نويسنده كارشناس ارشد بيولوژي دريا، واحد علوم و تحقيقات تهران ataeitalebi, Mahba
چكيده فارسي :
به منظور مطالعه فيلوژني مولكولي خيارهاي دريايي غالب در سواحل جزر و مدي جزيره قشم، تعداد ?? نمونه از هر گونه، جمع آوري و پس از تثبيت در اتانول ?? درجه، به آزمايشگاه منتقل شد. در آزمايشگاه نمونه ها در دماي20ـ درجه سانتي گراد نگهداري شدند. DNA ژنومي نمونه ها با استفاده از كيت استخراج DNA(Marine Animal Tissue Kit) استخراج شد و كميت و كيفيت آن به كمك الكتروفورز ژل آگارز 1 درصد و رنگ آميزي توسط اتيديوم برومايد مورد بررسي قرار گرفت. واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR) با يك جفت پرايمر اختصاصي صورت گرفت. محصول تكثير شده روي ژل آگارز ? درصد مشاهده شد و پس از تأييد اندازه و كيفيت قطعه تكثير شده، محصولات PCR جهت انجام عمليات توالي يابي آماده سازي شدند. توالي يابي براي هر نمونه طي دو مرحله انجام شد. در نوبت اول، عمليات خوانش با پرايمرهاي اختصاصي صورت گرفت، اما به علت زيادبودن طول قطعه تكثير شده، براي مرحله دوم پرايمرهاي داخلي طراحي شد. جهت تجزيه و تحليل فيلوژني، نرم افزارهاي ClustalX2 و PAUP مورد استفاده قرار گرفت. از نرم افزار ClustalX2 براي بررسي توالي ها پس از BLAST در بانك ژني و همچنين جهت رسم درخت Neighbor joining استفاده شد. با استفاده از نرم افزار PAUP، درخت فيلوژني Maximum Parsimony رسم گرديد. سپس با نرم-افزار Tree view درخت فيلوژني مشاهده شد. به منظور بررسي صفات ريخت شناسي، اسپيكول هاي ميكروسكوپي استخراج گرديد و مورد مطالعه قرار گرفت. اسپيكول ها نيز متعلق به گونه هاي Holothuria arenicola و Holothuria parva بودند. اين شناسايي توسط دكترGustav Paulay از موزه تاريخ طبيعي فلوريدا تأييد شد. نتايج به دست آمده از توالي يابي نشان داد كه گونه Holothuria arenicola بررسي شده از سواحل جزر و مدي جزيره قشم، داراي 9? درصد شباهت و هم پوشاني با Holothuria arenicola ثبت شده در بانك ژني آمريكا است. گونه Holothuria parva كه تاكنون در بانك ژني به ثبت نرسيده است، داراي بيشترين ميزان تشابه با گونه Holothuria edulis است.
