همسان‌سازي، تعيين توالي و بيان بخش C ترمينال پروتيين شوك حرارتي 70(70 HSP )مايكوباكتريوم آويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس

پروتيين‌هاي شوك حرارتي (HSPs) در نقش كمك ايمني باعث افزايش توان پاسخ دستگاه ايمني ذاتي و اختصاصي بدن نسبت به آنتي ژن‌هاي مختلـف بـه خصوص آنتي ژن‌هاي توموري و آنتي ژن‌هاي عوامل عفوني مختلف مي‌شوند. بخش C ترمينال پروتيين شوك حرارتي مايكوباكتريوم توبركلوزيس در كنار آنتي ژن‌هاي پروتييني ساختاري قدرتمند براي تحريك پاسخ‌هاي ايمني فراهم مي‌آورد. در مورد پروتيين شوك حرارتي 70 متعلق به گونه پاراتوبركلوزيس و نقش آن در تحريك سيستم ايمني مطالعات چنداني صورت نگرفته است، اما به نظر مي‌رسد در ساختار واكسن DNA هم‌چون توبركلوزيس از توانايي‌هاي بالايي برخوردار باشد. در اين مطالعه پلاسميد اوكاريوتي ‌1pEGFP-N حاوي قسمت C ترمينال پروتيين شوك حرارتي مايكوباكتريوم پاراتوبركلوزيس طراحي و ساخته شد. در اين پلاسميد از ژن پروتيين سبز درخشان در كنار ژن هدف براي تاييد بيان و بررسي كارايي پلاسميد استفاده گرديد. صحت توالي نوكليوتيدي قطعه همسان‌سازي شده در پلاسميد مزبور با روش تعيين توالي مشخص شد.همچنين بيان پروتيين حاصل از پلاسميد طراحي شده در كشت سلول ‌7COS-‌ با رونوشت برداري معكوس به اثبات رسيد . نتايج حاصل از اين مطالعه نشان داد كه پلاسميد بيان شونده اوكاريوتي ‌1pEGFP-N حاوي قطعه C ترمينال ژن پروتيين شوك حرارتي مايكوباكتريوم آويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس به خوبي قابليت بيان در كشت سلول‌ 7COS-‌ را دارد. اين پلاسميد را مي‌توان به‌عنوان يك محمل در تهيه واكسن‌هاي DNA واجد قطعه C ترمينال پروتيين شوك حرارتي 70 مايكوباكتريوم آويوم تحت گونه پاراتوبركلوزيس به كار برد.

Heat shock proteins (HSPs) have been shown to act as an adjuvant when co-administered with different antigens, especially tumor antigens or antigens from infectious agents. C-terminal domain of Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70 (Hsp70), when fused to peptide antigens, provides a unique structure that is able to induce potent immune responses. In this study, aneukaryotic expression vector pEGFP-N1, containing C-terminal domain of Mycobacterium paratuberculosis HSP 70, Green Fluorescent Protein (GFP) gene in the plasmid construct , was designed for use as a reporter. With GFP system, expression of the target protein was evaluated in the cell culture. The nucleotide sequence of the cloned gene was revealed by sequencing. The protein expression of designed plasmid was also proved by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Our eukaryotic expression vector (pEGFP-N1 -hsp70 c-terminal) was successfully constructed and HSP70 c-terminal domain protein was expressed effectively. The current experiment, as a basis for a new DNA vaccine design, can be used for the future studies on reverse vaccinology.