چگونگي استفاده از روش PCR-SSCP براي بررسي چند شكلي ژن لپتين گوسفند كرماني

Using PCR-SSCP Technique to Investigate Polymorphism of Leptin Gene in Kermani Sheep

چكيده شناسايي ژن هاي موثر بر تعادل انرژي، توليد شير و مصرف خوراك از علاقه مندي هاي اخير پژوهشگران اصلاح نژاد است. در ايران علي رغم وجود منابع غني حيواني، تلاش هاي اندكي براي شناسايي ژن هاي كنترل كننده ي صفات در آنها صورت گرفته است. بنابراين، شناسايي ژن هاي كانديداي موثر بر صفات اقتصادي مي تواند به اصلاح نژاد گوسفند در كشور كمك شاياني نمايد. در اين تحقيق براي بررسي چند شكلي ژن لپتين از 120 راس گوسفند نر و ماده ي كرماني ايستگاه اصلاح نژاد شهر بابك خونگيري شد. پس از استخراج DNA با استفاده از كيت استخراج استاندارد، واكنش زنجيره اي پلي مراز براي تكثير قطعه ي 275 جفت بازي از اگزون سوم اين ژن انجام شد. پس از تعيين چند شكلي فضايي تك رشته اي، محصولات PCR، الگوهاي باندي مربوط به ژن لپتين با استفاده از ژل آكريل آميد و رنگ آميزي نيترات نقره، بدست آمد. براي ژن لپتين در نمونه ي مورد مطالعه، 10 الگوي A/A، C/C، A/B، A/C، A/B/C، A/B/E، A/B/F، A/C/F، A/B/D/E وA/B/C/F بدست آمد كه نشان دهنده ي چندشكلي بالاي در ژن لپتين گوسفندان نژاد كرماني مي -باشد.

Identification of associated genes with energy balance, yield and feed intake are recent interests of the animal breeding researchers. With consider to rich resources of animals, in our country-Iran, accomplish a little assay for identification of genes that controlling its traits with molecular techniques. Identify the candidate genes in sheep breeds using DNA test can have a great help for their breeding progress. In this research, for analysis of leptin gene polymorphism in Kermani sheep, we collected blood samples of one hundred and twenty male and female Kermani sheeps which were rearing in breeding center of Shahre Babak, Kerman. Genomic DNA was extracted using commercial DNA extraction Kit. The exon 3 (275 bp segment of exon 3) of leptin gene was amplified with specific primers. The single stranded conformation polymorphism (SSCP) patterns of PCR product were studied using Acrilamid gel and silver staining method. We obtained 10 band patterns for leptin gene: A/A, C/C, A/B, A/C, A/B/C, A/B/E, A/B/F, A/C/F, A/B/D/E and A/B/C/F. The results showed that leptin gene is so polymorphic in studied population.