مقايسه كارايي روش استخراج بافر-دترجنت با روش استاندارد نمكي براي تخليص DNA از نمونه هاي خون و اسپرم

Comparison of the efficiency of the buffer/detergent extraction and standard salting-out methods for DNA extraction from blood and semen samples

استخراج DNA ژنومي با كميت و كيفيت مطلوب از نيازهاي اساسي زيست شناسي مولكولي است. بيشتر روش-هاي تجاري استخراج DNA زمان بر هستند و با استفاده از آنزيم‌ها (مانند پروتييناز K) و حلال هاي آلي سمي (مانند فنل و كلروفرم) انجام مي‌شوند. از آنجايي كه اين آنزيم ها گران قيمت و مواد شيميايي مورد استفاده مضرند، به يك روش استخراج DNA كه اين معايب را نداشته باشد، نياز است. اين تحقيق به‌منظور مقايسه روش استخراج بافر-دترجنت با روش استخراج نمكي در گونه هاي مختلف، شامل نمونه هاي خون گاو، گوسفند، بز و مرغ، و نمونه هاي اسپرم گاو و قوچ، انجام شد. براي استخراج DNA و مقايسه دو روش، از 366 نمونه خون و 26 نمونه اسپرم استفاده شد. پارامترهاي كميت و كيفيت با استفاده از نانودراپ و ژل آگارز 1% و بازدهي واكنش زنجيره اي پلي مراز (PCR)، در هر دو روش ارزيابي شدند. پارامترهاي غلظت و خلوص DNA استخراج‌شده با روش استخراج با شوينده هاي تجاري به‌ترتيب 198±8/623 و 05/0±87/1 و با روش استخراج نمكي به‌ترتيب 178±1/413 و 042/0±82/1 بود. DNAهاي استخراج‌شده با هر دو روش PCR موفقي داشتند كه مطرح‌كننده فقدان ممانعت‌كننده ها در واكنش است. نتايج الكتروفورز فقدان شكستگي در نمونه ها را تاييد كرد. تحقيق حاضر نشان داد كه استخراج DNA با روش بافر-دترجنت نتايج مطلوبي دارد و در نتيجه، روش بافر-دترجنت بهينه يك روش سريع، ايمن و ارزان است و DNA استخراج‌شده با اين روش كميت و كيفيت بالايي دارد. به‌نظر مي‌رسد اين روش براي استخراج DNA از نمونه هاي خون و اسپرم در آزمايشگاه هاي مولكولي مناسب است. واژه‌هاي كليدي: استخراج DNA؛ روش بافر-دترجنت؛ كميت و كيفيت DNA؛ PCR.