شناسايي سودوموناس آيروژينوزا جدا شده از نمونه‌هاي تنفسي با استفاده ازواكنش زنجيره اي پليمراز(PCR) اختصاصي ژنهاي ليپوپروتيين غشاي خارجي oprL و oprI و اگزوتوكسين A

PCR identification of Pseudomonas aeruginosa based on two outermembrane lipoprotein oprI, oprL, and exotoxin A gene

مقدمه: سودوموناس آيروژينوزا از مهمترين عوامل مرگ و مير ناشي از عفونت هاي بيمارستاني مي باشد. با توجه به اهميت تشخيص سريع اين باكتري و اشكالات موجود در روش هاي بيوشيميايي در شناسايي اين باكتري، هدف بررسي توانايي آزمون PCR دو ژن اختصاصي جنس و گونه oprI و oprL و ژن اگزوتوكسين A (toxA) در شناسايي سودوموناس آيروژينوزا جدا شده از نمونه هاي تنفسي مي باشد. بحث و نتيجه گيري: جهت شناسايي سريع سودوموناس آيروژينوزا از نمونه هاي باليني با توجه به نتايج بدست آمده با استفاده از PCR دو ژن oprI و oprL از حساسيت بيشتر و اختصاصيت كمتري برخوردار است در صورتي كه تشخيص اين باكتري با استفاده از ژن toxA داراي اختصاصيت بيشتري است. يافته ها: از 120 سويه سودوموناس آيروژينوزا مورد بررسي در اين مطالعه كه با تستهاي بيوشيميايي جنس و گونه آنها تاييد شد 120 نمونه(100%) باروش ملكولي PCR نسبت به ژنهاي اختصاصي oprI و oprL مثبت بودند. همچنين از اين تعداد، 100 سويه (83%) حاوي ژن توليد كننده اگروتوكسين A بودند. مواد و روش ها: 120 نمونه سودوموناس آيروژينوزا ازعفونتهاي تنفسي جمع آوري شدند. DNA باكتري استخراج شده و آزمون PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي جنس و گونه (oprI و oprL)و پرايمرهاي ژن اگزوتوكسين A (toxA) انجام شد

Background: Pseudomonas aeruginosa has emerged as one of the most important nasocomial pathogen resulting in morbidity and mortality rates. The aim of this research was to PCR identification of P. aeruginosa isolated from tracheal samples based on the amplification of I lipoprotein (oprI) for detection of genus and L lipoprotein (oprL) for detection of species and Exotoxin A (toxA) gene. Materials and Methods: A total of 120 P. aeruginosa clinical isolates were collected from patients with tracheal infections. Chromosomal DNA of the isolates was extracted and used for PCR of oprI, oprL and Exotoxin A (toxA). Results: From 120 P. aeruginosa 100% were positive for oprI and oprL genes based on PCR assay and from these samples 83% were positive for ExotoxinA (toxA). Conclusion: Using PCR method with genome and specific primers can be more accurate and sensitive than biochemical tests to identify P.aeruginosa strains. It is also replaceble method for biochemical methods. According to the results obtained by PCR test toxA gene is not as sensitive as oprI and oprL to recognize P. aeruginosa. So using PCR of all these three genes are necessary to detecte this bacterium.