پديد آورندگان :
طوسي ، پرويز نويسنده tousi, parviz , ميرزائي، منصوره نويسنده , , محمودي راد، مهناز نويسنده دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي mahmoudi rad, mahnaz , مصفا، نريمان نويسنده mosafa, nariman , مروج، حميد نويسنده دانشگاه علوم پزشكي شهيد بهشتي,مركز تحقيقات پوست ,
كليدواژه :
كاريوتايپينگ , ايمونوفنوتايپينگ , فيبروبلاست , بانك سلولي
چكيده فارسي :
سابقه و هدف: فيبروبلاست‌ها سلول‌هاي مزانشيمي هستند كه به آساني در آزمايشگاه كشت داده مي‌شوند و نقش مهمي در تقابلات مزانشيم و اپيدرم و ترشح فاكتورهاي رشد و سايتوكاين‌ها مختلف دارند كه اثر مستقيمي بر رشد و تمايز اپيدرم و تشكيل ماتريكس خارج سلولي دارند. تحقيق حاضر با هدف بررسي امكان تهيه و توليد استاندارد فيبروبلاست انساني صورت گرفت. مواد و روش‌ها: تحقيق به روش اكتشافي انجام گرفت. از ناحية درم پوست ختنه‌گاه نوزاد براي تهية فيبروبلاست استفاده شد. فيبروبلاست‌ها توسط آنزيم تريپسين جدا گشته و به منظور ايجاد بانك فيبروبلاست چندين بار در محيط DMEM كشت داده شدند. سلول‌ها از نظر آلودگيهاي باكتريايي و ويروسي با روشهاي مولكولي و از نظر كاهش عرضة آنتي‌ژن‌هاي MHC تا پاساژ دهم مورد بررسي قرار گرفتند. همچنين براي يافتن اختلالات ژنومي، كاريوتايپ سلول‌هاي پاساژهاي اول، پنجم، دهم و بيست و دوم تعيين شد. يافته‌ها: فيبروبلاست‌هاي به‌كاررفته براي توليد بانك سلول از نظر وجود برخي ويروس‌ها و باكتري‌ها به روشهاي مولكولي مورد بررسي قرار گرفته كه نتايج همگي منفي بود. بررسي سلول‌هاي پاساژ داده شده از لحاظ ميزان عرضة آنتي‌ژن‌هاي MHC در سطح آنها نشان داد كه ميزان اين آنتي‌ژن‌ها به مرور در طي پاساژها كم شده است. نتيجة كاريوتايپينگ سلول‌هاي فيبروبلاست پاساژ اول، پنجم و دهم طبيعي بود ولي كاريوتايپينگ فيبروبلاست‌هاي پاساژ بيست‌‌ودوم نشان‌دهندة ناهنجاريهاي زيادي در كروموزوم‌هاي اين سلول‌ها بود. جداشدگي كروموزوم‌ها از محل سانترومر در تعداد قابل توجهي از كروموزوم‌ها مشاهده شد. نتيجه‌گيري: بهترين زمان براي ايجاد يك بانك فيبروبلاست از نظر حداكثر ميزان فعاليت فيبروبلاست‌ها، كمترين ميزان آنتي‌ژنيسيتي و نيز عدم وجود اختلالات ژنتيكي، سلول‌هاي پاساژ پنجم تا دهم است. براي ممانعت از بروز اختلالات ژنتيكي در فرايند كشت مجدد فيبروبلاست‌ها بايد تمهيداتي از جمله انتخاب بهترين كلون‌ها از نظر عاري بودن از ناهنجاريهاي كروموزومي در كاريوتاپينگ و نيز به حداقل رساندن زمان جداسازي سلول‌ها در روش آنزيماتيك مد نظر قرار گيرند.
