بررسي بيان مولكولي ژنهاي زيرواحد هاي گيرنده GABAA در سلولهاي جنيني كليه انسان (HEK 293)

An analysis of molecular expression of GABAA receptor subunit genes in human embryonic kidney 293 cells

سلولهاي HEK 293 به عنوان سيستم ترانس فكشن گذرا از مفيدترين سيستمهاي بيان ژني جهت مطالعه خصوصيات فيزيولوژي و فارماكولوژي گيرنده هاي گابا مي باشد. خصوصيات بيان ژني اين سلولها با كانالهاي طبيعي (گابا) نزديك بوده و محيط داخل سلولي آنها در مقايسه با ساير سيستمهاي بيان ژني، مشابه (بافت عصبي) مي باشد. از آنجايي كه mRNA هاي گابا مانند گاما 3 در اين سلولها به طور معني داري يافت شده است، در تفسير نتايج مطالعاتي كه ژنهاي گابا در سلولهاي HEKبيان مي شوند به ويژه آنهايي كه سطح عملكرد پاييني دارند بايد توجه لازم مبذول شود. در اين مطالعه mRNA درون زاد زير واحد هاي آلفا يك و آلفا دو و گاما يك و گاما دو گابا با استفاده ازPCR و real time PCR بررسي شد. نتايج اين مطالعه نشان داد كه mRNA هيچ كدام از گيرنده هاي گابا مورد مطالعه در سلولهاي HEK 293 بيان نمي شوند. نتايج اين مطالعه همچنين معرف آن است كه دودمان سلولي HEK 293 مي تواند جهت بيان و مطالعه فيزيولوژي و فارماكولوژي گيرنده هاي نوتركيب گابا به كار گرفته شود.

HEK (human embryonic kidney) 293 cells as transient transfection systems are the most useful expression method to study physiological and pharmacological properties of the GABAA receptor subunits. HEK properties are similar to the native expressed channels. In comparison to the other common artificial expression systems, HEK cells have a similar mammalian intracellular environment. Since some mRNAs such as GABAA ?3 are significantly found in HEK 293 cells, caution must be taken in interpreting the results of studies of the properties of GABAA receptors expressed in HEK 293 cells. In this study we examined the endogenous mRNA content of GABAA receptor subunits Alpha1 and Alpha2 and Gama1 and Gama2 in HEK 293 cells using traditional PCR and real time PCR. Total cellular RNA was extracted from HEK 293 cells and reverse transcribed to cDNA. PCR and real time PCR reactions were performed in a 25 ?l volume containing specific forward and reverse primers for GABAAR subunits with other required reagents. Reactions were carried out using a thermocycler. The amplification products were analyzed on 2 % agarose gels stained with ethidium bromide. In this study, none of GABAAR subunits in HEK cells were detected. The results show that HEK 293 cell line can be used as an expression system for the analysis of GABAA receptor recombinants.