بررسي موتاسيون هاي ژن rpoB در سويه هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس جدا شده از بيماران شهر تهران

Characterization of mutations in the rpoB gene, of Mycobacterium tuberculosis isolated, from Tehran City

سابقه و هدف: مايكوباكتريوم توبركلوزيس باكتري عامل بيماري سل است كه سالانه حدود 2 ميليون نفر بر اثر ابتلا به اين بيماري جان خود را از دست مي دهند. وجود باكتري هاي مقاوم به دارو هاي ضد سلي از عوامل مهم مرگ افراد مبتلا به سل است. از جمله مهم ترين اين داروها، داروي ريفامپيسين است كه به نظر مي رسد مكانيسم عملكرد اين دارو، دخالت در فرايند رونويسي از طريق اتصال به زيرواحد B آنزيم RNA پليمر از مي باشد. مقاومت مايكوباكتريوم ها به اين دارو در اثر جهش در ناحيه bp 81 ژن rpoB است كه اين ژن رمز كننده زير واحد B آنزيم RNA پليمراز مي باشد. اين تحقيق با هدف شناسايي نوع و فراواني جهش هاي اين ناحيه، در نمونه هاي شهر تهران صورت گرفت. مواد و روش ها: در اين مطالعه 65 بيمار مبتلا به سل كه پس از 6 ماه درمان با داروهاي ضد سلي به درمان جواب نداده بودند، انتخاب شدند و از آن ها پس از اخذ رضايت، نمونه خلط گرفته شد. پس از كشت نمونه ها در محيط كشت جامد لون اشتاين جانسون و پس از انجام تست هاي حساسيت، نمونه هاي مقاوم به ريفامپيسين شناسايي شدند. ژن rpoB نمونه هاي مقاوم به ريفامپيسين تكثير شد و توالي يابي گرديد. نتايج توالي يابي توسط برنامه DNAMAN آناليز گرديد. يافته ها: در اين تحقيق، 35 نمونه مقاوم به ريفامپيسين شناسايي گرديد. آناليز هاي كامپيوتري نشان داد كه 14نمونه (70%) داراي جهش در ناحيه 81bp ژن rpoB مايكوباكتريوم توبركلوزيس و 6 نمونه نيز فاقد هرگونه جهش در اين ناحيه بودند. فراوان ترين جهش ها در كدون هاي 531 (40%) و 515 (20%) مشاهده گرديد. جهش جديدي نيز در كدون 515 در 5 سوش مشاهده گرديد. جهش در كدون هاي 526 (10%) و 510 (15%) نيز مشاهده شد. نتيجه گيري: فراوان ترين جهش ها در نمونه هاي شهر تهران در كدون هاي 531 و 515 واقع شده اند. وجود جهش جديد در كدون 515 نشانگر الگوي متفاوت جهش در تهران مي باشد. داده هاي ما 6 نمونه فاقد جهش در اين ناحيه و چند نمونه داراي جهش در خارج از اين ناحيه را نشان مي دهد. اين نتايج ما را به اين نظريه مي رساند كه مقاومت مايكوباكتريوم توبركلوزيس نسبت به داروي ريفامپيسين مي تواند علاوه بر عوامل ژنتيكي داراي عوامل غير ژنتيكي نيز باشد و يا ممكن است ژن هاي ديگري نيز در ايجاد مقاومت به ريفامپيسين نقش داشته باشند كه با مطالعات اپيدميولوژي مولكولي مطابقت دارد.

Aim and Background. The aim of this study was to investigate the frequency, location and type of rpoB mutations in Mycobacterium tuberculosis isolated from patients in Tehran City. Materials and Methods. 65 sputums were collected from suspected tuberculosis patients, 35 Rif-r isolates were identified as Mycobacterium tuberculosis. PCR Amplification and DNA sequencing methods were performed. 411 bp fragments of rpoB gene were sequenced and mutations in 81 bp regions were analyzed. Results. 38 mutations were identified in 14 RIF-r MBT (70%). Missense mutations produced 38 types of amino acid substitutions. In 6 RIF-r MBT isolates (30%) no mutations were found in the core region of the rpoB gene. Most frequent mutations detected from Tehranian strains were in codons 531 and 515. Two alleles in codon 531 and one allele in all codons 526, 515, 510, 566, 490 and 476 were found. In the 6 isolates were identified 2 mutation in different codons and 8 strains harboured single mutations in codons . Conclusion. In this study, has been investigated the significance of mutations in the rpoB gene, its correlation with genotype and phenotype agents and high level of resistance to rifampicin in 14 isolates of M. tuberculosis collected from patients with active pulmonary tuberculosis from different geographic regions of Tehran.