تشخيص موتاسيون مقاوم به دارو ناحيه YMDD ژن پلي مراز ويروس HBV دربيماران مبتلا به هپاتيت B از طريق روشLigase Chain Reaction (LCR

Detection of Drug Resistance Mutation in the YMDD Region of Polymerase Gene of HBV in Polymerase Gene of HBV in Hepatitis B Patients by Ligase Chain Reaction (LCR)

سابقه و هدف: هپاتيت B، بيماري بسيار خطرناكي است كه به صورت اندميك در بسياري از مناطق جهان مشاهده مي شود. ويروس هپاتيت (HBV) نسبت به يك سري داروهاي ضد ويروسي از جمله لاميوودين حساس بوده (%98)، بطوري كه به نواحي خاصي از آنزيم DNA پلي مراز ويروس متصل مي گردد و مانع عمل ترانس كريپتاز معكوس و همانند سازي DNA ويروسي مي شود. در اثر مصرف طولاني مدت دارو، جهشي در موتيف YMDD در دومين C ژن پليمراز ويروس ايجاد مي شود كه سبب مقاومت ويروس نسبت به اين دارو مي گردد. در اين مطالعه به منظور شناسايي سريع تر و دقيق تر موتاسيون YMDD و بنابر اهميت شيوع موتاسيون فوق، جهت مقاومت ويروس نسبت به دارو، از طرفي ارتباط بين اين تغيير ژنومي با پيشرفت بيماري هاي كبدي و اثر آن بر روي سير بيماري زايي و پاسخ به درمان، روش LCR مورد استفاده قرار گرفت. مواد و روش ها: در اين مطالعه، 62 نمونه حاصل از Nested PCR ژن پلي مراز ويروس HBV از طريق تكنيك LCR مورد بررسي قرار گرفت. سه جفت اليگونوكليوتيد bp 26-21 براي ناحيه YMDD هم براي نمونه نرمال و هم براي نمونه موتان طراحي گرديدكه سبب تكثير ناحيه bp 47 شد. يافته ها: از 62 نمونه مورد بررسي، 51 نفر (25/82%)، بدون موتاسيون در ناحيه YMDD و 11 بيمار (74/17%) داراي موتاسيون در ناحيه فوق بودند. نتيجه گيري : بررسي نتايج حاصل از LCR نشان دادكه در بيماران هم نوع وحشي و هم نوع موتان HBV وجود دارد در نتيجه براي بررسي وجود يا عدم وجود موتاسيون از اليگونوكليوتيدهاي موتان استفاده شد. نتايج حاصل از روش LCR مطابقت كامل با نتايج حاصل از تعيين توالي نشان داد.

Aim and background. Hepatitis B and its incidence are considered as an endemic disease worldwide. In addition to creation of critical and chronic hepatitis B disease, in patients who suffer from chronic kind of this infection there are hepatocelullar carcinoma or hepatic cirrhosis presumptions or other kinds of defections. HBV (hepatitis B virus) is also up to 98 percent sensitive to some medicines like lamivudine. Lamivudine blocks viral DNA polymerase enzyme reverse transcriptase action through binding to its specific regions. But problem may be formed in patients whom are exposed to lamivudine for long time; a new mutation occurs in C domain of YMDD motif and of viral DNA polymerase gene that leads to lamivudine resistance. Molecular diagnosis of this mutation is essential with regard to considerable relationship between mutation occurrence rate and infection incidence range due to host immune system. We chose LCR method due to its ease achievability compared with others to detect the mutation. Materials and methods. 62 Nested PCR viral polymerase gene samples of HBV using LCR were surveyed. Five pairs of 21_26bps oligonucleotides were designed for both wild type and mutant YMDD region which amplify a 47bps region. Results. 51 of 62 patients have been non mutant in YMDD motif (82.25%) while 11 patients have been mutant in YMDD motif (17.74%). LCR. Conclusion. Investigation of LCR conclusions has shown that there is both wild and mutant type of HBV in patients. For this reason, we utilized mutant oligonucleotides and its bonds on gel were seen. Results are completely in conformation to sequencing conclusions