مطالعه تغييرات ژن53P (اگزون‌هاي 5و6) در تومورهاي مثانه گاو

Study on P53 gene alterations (5 and 6 exons) in bovine urinary bladder tumors

زمينه مطالعه: 53‌P يك ژن سركوب كننده تومور است. موتاسيون اين ژن بطور معمول در تومور‌هاي مثانه در گاو بروز مي‌يابند. هدف: مطالعه تعيين موتاسيون‌هاي احتمالي در اگزون‌هاي 5 و6 ژن ‌53‌P به روش SSCP مي‌باشد. روش كار: براي اين منظورتعداد 15 بلوك پارافيني از نمونه‌هاي مختلف تومورهاي مثانه گاو شامل كارسينوماي سلول ترانزيشنال (3 مورد)، كارسينوماي سلول سنگفرشي (2 مورد)، همانژيوما (3 مورد)، پاپيلوما (2 مـورد)، كـارسينـومـاي در جـا (3 مـورد) فيبـرومـا (1 مـورد)، ليـوميـومـا (1 مـورد) از مـوارد گـاوهاي كشتارگاهي استان گيلان انتخاب گرديدند.پس از استخـراج‌‌DNA، با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي اگزون‌هاي 5 و6، ‌ انجام و محصولات ‌ با الكتروفورز بر روي ژل آگارز 5/1 درصد بررسي شدند. محصولات ‌ با روش ‌ مورد ارزيابي قرارگرفتند تا نمونه‌هايي كه داراي تغيير الكتروفورتيك بودند، مشخص گرديده و براي تعيين توالي ارسال شوند. نتايج: در اين مطالعه در محدوده اگزون‌هاي 5 و6 هيچ تغيير الگوي الكتروفورتيك مشاهده نشد. در 3 نمونه شامل همانژيوما، پاپيلوما و كارسينوماي در جا، تغيير الگوي الكتروفورزي مشاهده گرديد كه پس از تعيين توالي مشخص گرديد كه در سه نمونه همانژيوما، پاپيلوما و كارسينوماي در جا، حذف نوكليوتيد T(‌)‌به شماره 9332 در اينترون 6 روي داده است. لذا موتاسيون‌هاي اينترونيك مي‌توانند زمينه ساز بروز سرطان شوند. نتيجه گيري نهايي: بنابراين در اين مطالعه اگرچه در اگزون‌هاي 5 و 6 هيچ موتاسيوني مشاهده نگرديد ولي با توجه به تغييرات اينترونيك مشاهده شده، بررسي موتاسيون‌هاي اينترونيك ژن p53 در تومورهاي مثانه درگاو ميتواند در آينده در شناخت انكوژنز اين تومورها موثر باشد.

BACKGROUNDS: P53 is a tumor suppressive gene which frequently mutates in tumors of animals and human. This gene commonly mutates in urinary bladder tumors of human beings. Urinary bladder tumors have occurred in cattle with bovine enzootic hematuria (BEH). OBJECTIVES: The aim of present study was to evaluate P53 mutations in 15 samples of different bovine urinary bladder tumors by the PCR-SSCP technique. METHODS: Fifteen paraffin embedded blocks were selected from different kinds of bovine urinary bladder tumors. DNA was extracted from the samples and PCR was done by using specified primers for 5 and 6 exons. After electrophoresis, the PCR products were assessed by the SSCP method, and samples with changes in electrophoresis patterns were selected and sequenced. RESULTS: Results showed that there are intronic alterations of the P53 gene in cattle with urinary bladder tumors. There were no changes in the electrophoretic pattern of exons 5 and 6, but on each side of the designed primers for exon 6, there was a part of introns 5 and 6. The samples, including Hemangioma, Papilloma and Carcinoma in situ with electrophoretic changes, showed nucleotide T deletion with number 9332 in intron 6 after direct sequencing. Intronic mutations can be a predisposition for developing cancers. CONCLUSIONS: It is possible that some of urinary tumors are inducted by P53 mutations in intronic zone.