بهينه سازي بررسي ميزان همانندسازي ويروس كمبود ايمني انساني تيپ يك با استفاده از ويريون هاي با قابليت يك سيكل تكثير

سابقه و هدف: ويريون مربوط به ويروس كمبود ايمني انساني (HIV) با قابليت همانندسازي در پژوهش هاي مربوط به HIV مانند پژوهش هايي با هدف يافتن تركيبات ضد ويروسHIV جديد مورد نياز است. در اين مطالعه، همانندسازي HIV-1 با استفاده از ويريون هاي با قابليت يك سيكل تكثير (SCR) انجام شد. روش بررسي: ويريون SCR به وسيله ترانسفكت كردن سلول هاي HEK293T با پلاسميدهاي pmzNL4-3 ، pSPAX2 و pMD2G توليد شد. سلول هاي هدف HEK با مقادير متفاوت از ويروس SCR آلوده شده و ميزان p24 مايع رويي سلول با p24 ELISA اندازه گيري شد. در ادامه، اثر ضد ويروسي HIV-1 دو داروي شناخته شده ايدز به نامهاي نويراپين و اينديناوير به عنوان كنترل مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: همانندسازي مناسب ويريون هاي SCR برروي سلول هاي هدف HEK با تيتر شروع كننده ng P24 600 ويروس بود. افزايش p24، 24 ساعت پس از آلودگي قابل سنجش بود و پس از گذشت 48 ساعت به حد اكثر مقدار رسيد. غلظتي از داروهاي نويراپين و اينديناوير كه 50 و 95 درصد توان بازداري HIV-1 ( IC50و IC95) را داشتند، به ترتيب حدود 50 و 25 نانو مولار بود. نتيجه گيري: ميزان اثر ضد ويروسي دو داروي نويراپين و اينديناوير نشان دهنده دقت مناسب اين روش براي سنجش اثر ضد HIV-1 تركيبات مختلف است. توان همانندسازي يك دوره اي SCR HIV باعث افزايش امنيت زيستي روش ابداعي در اين مطالعه مي باشد

Background: HIV virions with replication capacity are needed for HIV researches, like investigating for new anti HIV agents. Here HIV-1 replication assay was optimized with HIV-1 single cycle replicable (SCR) virions to improve biological safety condition. Materials and methods: pSPAX2, pmzNL4-3 and pMD2G plasmids were co-transfected to the HEK293T by using polyfect reagent to produce the SCR HIV-1 virions. Virions were quantified using capture ELISA P24. Different MOI of SCR virions were used for infecting of Target cells (HEK) and the load of the supernatant P24 was monitored days after infection. Single cycle replication assay (SCRA) was developed using kinetic studies data. Results: The P24 load of the infected cells supernatant has linear relation to the beginning infectious MOI. 24 hours post infection with HIV-1 SCR virions the viral particle production was detectable. The highest load of P24 in infected cells supernatant was detected 48 hours after infection. Using this developed method, the 50 and 95 percent inhibitory concentration of (IC95 and IC50) Indinavir and Nevirapine were calculated as 25nM and 50nM. Conclusion: In this study, using SCR HIV-1 virions the SCRA was developed. SCR HIV-1 virions are replicable only for one cycle and this improves the safety of developed assays. The accuracy of assay was examined by quantifying the anti HIV-1 potential of two commercial anti-AIDS drugs and the calculated activity for test agents was equal to previously known amounts