تخليص و جدا سازي پادگن هاي اگزو توكسين (Bacillus anthracis (PA،LF،EF سويه 34F2 به روش اولترا فيلتر و HPLC

Purification & separation of Bacillus anthracis 34F2 Antigens with UF & HPLC

بيماري آنتراكس(شاربن) يكي از مهمترين بيماري‌هاي مشترك بين انسان ودام مي باشد. عامل آن باكتري گرم مثبت و ميله اي شكل B.anthracis است. B.anthracis داراي دو عامل بيماري زاي شناخته شده شامل يك سم پروتييني سه قسمتي ويك كپسول پلي دي گلوتاميك اسيد مي‌باشد. با توجه به اين كه توكسين باكتري نقش مهمي در بيماريزايي وتهيه واكسن دارد، لذا جداسازي و تخليص آن همواره مورد توجه محققين بوده است. سم سه قسمتي شامل پادگن هاي PA, LF, EF مي‌باشد. درك بيشتر اكتيويته سم، نقش هر يك از اجزا توكسين در بيماري زايي وحفاظت در برابر بيماري وتهيه پادگن براي به كار رفتن در سيستم هاي تشخيص نيازمند درجات بالاي تخليص مي‌باشد. در اين تحقيق پس از كشت باكتري روي محيط كشت اختصاصي و جدا نمودن محلول رويي از پيكره باكتري، اين محلول از اولترا فيلتر(UF) با Cutoff 30000 و 50000 و 100000 عبور داده شد و سپس عمليات ترسيب با سولفات آمونيوم و دياليز انجام گرديد.كه نهايتاً با استفاده از دستگاه HPLC پادگن هاي توكسين B.anthracis از يكديگر جدا شد و در روش الكتروفورز اين پادگن ها (EF,LF,PA) به ترتيب با وزن مولكولي هاي 86, 87, 85 كيلودالتون و با خلوص بالا مشخص گرديد.

Anthrax is one of the important zoonose disease between human and cattle. Bacillus anthracis is a gram- positive bacterium which its tripartite protein toxin contains protective antigen (PA), edema factor (EF) and lethal factor (LF) and a poly D- glutamic acid capsule. A recent resurgence of interest in B.anthracis resulted in improved methods for production, separation and purification of the known toxin components. This in turn has lead to development of much more sensitive toxin-detection systems. Further understanding of toxin activity, the role of individual components in protection against the disease and the production of antigens for use in diagnostic requires high-degree of purity. In this study after cultivation of bacteria and separaing the supernatant the solution was passed through different membrane of ultra filter system with 30000, 50000 and 100000 Dalton molecular weight cut off respectively. The final solution was treated with ammonium sulphate and the antigens prepared which after dialysis have passed through gel chromatography of HPLC for separating of B.anthracis toxins. Finaly three toxin antigens EF,LF and PA with 86, 87 and 85 K dalton molecular weight of high purity were obtained.