ارزيابي آنتي ژنيسيته مايع كيست هيداتيك و پروتواسكولكس به روش ايمنوديفيوژن دوبعدي

Evaluation of antigenicity of hydatic cyst and its protoscolexes by designing a new double immunodiffusion test

روش هاي تشخيصي مختلفي براي كيست هيداتيك در دسترس است. براي طراحي كيت هاي سرولوژيكي بر مبناي رديابي پادكني، وجود پادتن مناسب و كافي بر عليه كيست هيداتيد مورد نياز مي باشد. در دو گروه مستقل، پادگن هاي مايع كيست و پروتواسكولكس ها از نمونه هاي گوسفندي جهت توليد پادتن پلي كلونال در خرگوش ها استفاده گرديد. تزريقات در پنج مرحله به صورت داخل و زير جلدي انجام گرفت و جهت مقايسه خاصيت آنتي ژنيسيتي در دو گروه و تعيين تيتر، تست دوبل ايمينو ديفيوژن طراحي گرديد. حداقل پادتن بدست آمده در هر دو گروه، مربوط به نمونه بعد از تزريق اول (رقت 1/1) و بيشترين آن پس از تزريق چهارم بدست آمد (رقت 16/1). ميانگين تيتر در همه آزمون هاي گروه اول، 20/11 و در گروه دوم 20/9 بدست آمد. با توجه به نتايج مبني بر بالا بودن قدرت آنتي ژنيسيته پروتواسكولكس از مايع كيست، مي توان در تحقيقاتي نظير مطالعات مولكولي، از پادتن عليه پروتواسكولكس هاي انگلي بهره جست و يا پس از خالص سازي و كونژوگاسيون آن با آنزيم مناسب، در جهت طراحي كيت هاي الايزاي تشخيصي سريع، گام برداشت.

There are various methods to diagnosis of hydatic cyst. Serological methods based on tracing special antigens have high sensitivity, but the first need to design the kits based on serological methods is having enough amount of appropriate antibody against hydatic cyst antigens. Hydatic cyst antigens and parasite protoscolexes prepared from sheep liver samples were injected to rabbits to obtain polyclonal antibodies. Injections were done five times both subcutaneously and intracutanously. We designed a double immunodiffusion test to compare antigenicity of two antigen groups as well as measurement of generated antibody levels. The least level obtained in both groups was from the first (dilution 1/1), and the highest level was from the last prepared sample after injection (dilution 1/16). Furthermore, mean generated antibody level in all examinations obtained 11/20 for the first group and 9/20 for the second group. By comparing the results of the studied groups, it could be concluded that antigenicity of protoscolexes are more than hydatic cyst fluid. So the antibodies against parasite protoscolexes could be used in investigations including molecular studies, and after purification and conjugation with appropriate enzyme, it also could be used to design rapid diagnostic ELISA kits