بيان نوتركيب فاكتور رشد اپيدرم انساني در باكتري E. coli و ارزيابي اثر آن بر دودمان سلولي NIH-3T3

Recombinant Expression of Human Epidermal Growth Factor in E. coli and Assessment of its Effect in NIH-3T3 Cell Line

خانواده EGF از بيش از 13 عضو تشكيل شده است و فاكتور رشد اپيدرمي عضو اصلي اين خانواده مي باشد كه در ترميم زخم هاي اپيدرمي نقش آفريني مي كند. اين فاكتور، يك پلي پپتيد اساسي براي ترميم زخم و آغاز تقسيم ميتوزي است. در اين مطالعه، ژن فاكتور رشد اپيدرم انساني از بانك ژني استخراج و پس از بهينه سازي كدون هاي آن بر اساس ترجيح كدوني باكتري E. coli در وكتور pET21a(+) سنتز گرديد. وكتور حامل ژن مذكور به باكتري E.coli به عنوان ميزبان بياني انتقال يافت و پس از بيان، فرآيند تخليص پروتيين با استفاده از روش كروماتوگرافي تمايلي انجام شد. نتيجه سنجش فعاليت زيستي در سه دُز مختلف نشان داد كه اين پلي پپتيد نوتركيب بر تكثير سلولي در دودمان سلولي NIH-3T3 تاثيرگذار است.

The EGF family include13 members and the hEGF as founding member of this family involves in epidermal wound healing. Epidermal growth factor is an essential polypeptide for wound healing and promoting mitotic division. In this study, human epidermal growth factor gene was adapted from gene bank and its codons were optimized according to codon preference of E. coli BL21. The gene was prepared as synthetic construct in pET21a (+). Then the recombinant construct was transferred to E. coli and hEGF gene in the vector was expressed under the control of inducible T7 promoter. Purification was done using affinity chromatography. The bioassay results of three different doses showed that recombinant protein has significant effects on growth of NIH-3T3 cell line.