تعيين مقاومت به آميكاسين در سويه هاي مايكوباكتريوم توبركلوزيس MDR به روش: PCR-RFLP

Detection of Amikacin-Resistance among MDR Strains of Mycobacterium tuberculosis by Using PCR-RFLP Method

زمينه و هدف: آميكاسين يكي از داروهاي كليدي خط 2 براي درمان سل مي باشد. جهش در كدون هاي 1400، 1401 و 1483 از ژن srRNA 16 با مقاومت به آميكاسين در ارتباط است. هدف از اين مطالعه آشكارسازي اين جهش ها با استفاده از روش PCR-RFLP درسوش هاي مقاوم به چند دارو (MDR; Multiple Drug Resistant) مايكوباكتريوم توبركلوزيس مقاوم به آميكاسين بود. روش كار: آزمون ارزيابي حساسيت دارويي با استفاده از روش تناسبي براي داروهاي خط 1 و 2 روي 100 ايزوله انجام شد. بر اساس نتايج حاصل از آن 97 ايزوله با روش PCR-RFLP مورد آزمون قرار گرفت. از پرايمرهاي 1096rrs و 1539rrs جهت تكثير ناحيه bp 460 از ژن rrs استفاده شد. سپس محصولات PCR توسط دو آنزيم برشگر Tai 1 و Dde 1 هضم گرديدند. از آزمون آماري مربع كاي با استفاده از نرم افزار SPSS جهت آناليز داده ها استفاده شد. يافته ها: بر اساس نتايج حاصل از روش تناسبي از مجموع 97 نمونه، 63 نمونه (9/64%) MDR و 26 نمونه (8/26%) حساس، 8 نمونه (2/8%) نيز MDR- non بودند. هم چنين 13 نمونه (4/13%) (XDR; Extensively Drug Resistant) و 6 نمونه (1/6%) (TDR; Totally Drug Resistant) شناسايي شدند. با استفاده از روش PCR-RFLP 7 نمونه (2/7%) مقاوم به آميكاسين و 90 نمونه (7/92%) حساس به اين دارو بودند. به علاوه ما دريافتيم كه فراواني جهش هاي مربوط به مقاومت به آميكاسين در كدون 1400از ژن rrs بيشتر از ساير كدون ها است. نتيجه گيري: روش PCR-RFLPمي تواند به عنوان يك روش مكمل در تشخيص موارد مقاوم به اين دارو استفاده شود. اگر چه براي افزايش حساسيت روش PCR-RFLP نياز به بررسي كدون هاي بيشتري از ژن rrs مي باشد.

Background & objectives: Amikacin is one of the key second-line drugs for treatment of tuberculosis. Mutations at the codons 1400, 1401and1483 of the 16srRNA gene are associated with resistance to amikacin. The purpose of this study was to detect these mutations using PCR-RFLP method in multi-drug resistant (MDR) strains of Mycobacterium tuberculosis showing resistance to amikacin. Methods: Susceptibility of strains (n=100) against first and second–line anti-tuberculosis drugs was performed by proportional method. Based on antimicrobial resistance pattern 97 strains were analyzed by PCR-RFLP method. rrs1096 and rrs1539 primers were used to amplify a 460bp region of the rrs gene. Then, the PCR products were digested using Tai 1 and Dde1 restriction enzymes. The results were analyzed by the SPSS software using Chi-square test. Results: Based on results from proportional method, 63 strains (64.9%) were MDR (Multiple Drug Resistant), 26 (26.8%) and 8 (8.2%) strains were susceptible and non-MDR, respectively. Also, 13.4% and 6.1% of the strains were XDR (Extensively Drug Resistant) and TDR (Totally drug resistant) respectively. Using PCR-RFLP method, 7 (7.2%) strains were resistant and 90 (92.7%) strains were susceptible to amikacin respectively. Moreover, we found that the mutation at the codon 1400 was the most frequent mutations responsible for resistance to amikacin. Conclusion: The PCR-RFLP method can be used as a supplemental method to detect resistance to amikacin; however to increase our knowledge, mutatuions in several number of codons in rrs gene need to be studied.