مطالعه وقوع آلودگي به گونه‌هاي مختلف تك ياخته تيلريا با روش Semi-Nested PCR در دامداري‌هاي سنتي دو منطقه اكولوژيكي استان گلستان

Study on the protozoal infection of Theileria species in Traditional animal husbandry in two ecological regions of Golestan province, Iran

امروزه روش‌هاي مولكولي بدليل دارا بودن حساسيت و ويژگي بالا، بيشتر از روش‌هاي قديمي تر مانند روش رنگ آميزي گيمسا و روش‌هاي سرولوژي براي جـداسـازي پيـروپلاسـم‌ها در حيوانات بكار گرفته مي‌شوند. بنابراين به‌منظور تشخيـص آلودگي به تيلريا آنولاتا‌‌و تيلريا اورينتاليس‌‌در گاوداري‌هاي سنتي دو منطقه اكولوژيكي استان گلستان، نمونه خون 160 راس گاو طي سال‌هاي 1388 تا 1389 تحت آزمايش قرار گرفت. در اين مطالعه استخراج DNA از همه نمونه‌هاي خـوني صورت پذيرفت و پرايمر‌هاي Tbs-S و Tbs-A براي تفريق گونه‌هاي تيلريا و بابزيا از يكديگر در آزمون PCR مورد استفاده قرار گرفت. كليه نمونه‌هاي مثبت PCR اوليه با پرايمر‌هاي اختصاصي تيلريا آنولاتا ‌‌(Ta-S/Tbs-A)‌ و پـرايمـرهـاي اختصـاصـي تيلريا اورينتاليس‌ ‌(To-S/Tbs-A)‌ ‌تحت آزمون Semi-Nested PCR قرار گرفتند. نتايج اين بررسي نشان داد كه 10 درصد گاو‌هاي مورد بررسي در مناطق خشك و 5 درصد گاو‌هاي مورد بررسي در مناطق مرطوب استان گلستان آلوده به تيلريا آنولاتا‌‌و 75/8 درصد گاو‌هاي مورد بررسي در مناطق خشك و 5/2 درصد گاو‌هاي مورد بررسي در مناطق مرطوب استان گلستان آلوده به تيلـريـا اورينتـاليـس‌‌مي‌باشند. در اين بررسي از يك سو براي اولين بار تيلريا اورينتاليس‌‌با روش مولكولي در ايران و از سوي ديگر براي اولين بار آلودگي توام تيلريا آنولاتا‌‌و تيلريا اورينتاليس‌‌در ايران گزارش مي‌شود.

Nowadays molecular assays, due to their high sensitivity and specificity rates, are more employed than the traditional methods, e.g. Giemsa staining and serology, for detection of piroplasmosis in domestic animals. Therefore, in order to diagnose Theileria annulata and Theileria orientalis in traditional cattle breeding in two ecological regions of Golestan province, north of Iran, we examined the blood samples of 160 cattle during 2009 to 2010. DNA was extracted from all blood samples. Tbs-S/Tbs-A primer set was used to amplify the both Genus of Theileria and Babesia species in PCR step. For detection and differentiation of Theileria annulata from Theileria orientalis, we examined all positive cases by Semi-Nested PCR method, using specific primers. The results revealed 10% of native cattle in dry areas as well as 5% of native cattle in wet areas harbored Theileria annulata, whereas the infection rate of Theileria orientalis in dry areas was 8.75% and in wet areas was 2.5%. This is the first report from Iran indicating the presence of Theileria orientalis and the mixed infection of both Theileria in native cattle of the country, confirmed by molecular procedures.