شناسايي ژن مقاومت به فلوكونازول ERG11 در نمونه‌هاي باليني كانديدا آلبيكنس جدا شده از بيماران آلوده به HIV با روش واكنش زنجيره اي پليمراز معكوس (RT-PCR)

Identification of fluconazole resistance gene ERG11 in clinical Candida albicans samples isolated from HIV-infected patients by reverse polymerase chain reaction (RT-PCR)

مقدمه و هدف: امروزه قارچ هاي فرصت طلب به ويژه قارچ كانديدا آلبيكنس ازجمله شايع ترين عوامل مخاطره انگيز در بيماران نقص سيستم ايمني هستند. افزايش روز افزون سويه هاي كانديدا آلبيكنس مقاوم به داروهاي آزولي مشكل اصلي بيماران مبتلا به ايدز است. هدف از اين مطالعه، بررسي ژن ERG11 در سويه هاي كانديدا آلبيكنس مقاوم به فلوكونازول در بيماران آلوده به HIV مبتلا به كانديديازيس دهاني حلقي به روش واكنش زنجيره اي پليمراز معكوس است. مواد و روش‌ها: اين مطالعه تجربي در سال 1388 در دانشگاه تربيت مدرس انجام شد. سويه هاي كانديدا آلبيكنس جدا شده از بيماران ايدزي با استفاده از روش هاي استاندارد مانند تشكيل جرم تيوب، كلاميدوسپور و رنگ كلني روي محيط كروم آگاركانديدا شناسايي شدند. ابتدا ميزان حساسيت سويه هاي كانديدا آلبيكنس مطابق روش استاندارد انتشار ديسك بررسي شد؛ سپس افزايش بيان ژن مقاومت به فلوكونازول ERG11 با روشRT-PCR ، در مقايسه با نمونه هاي شاهد ارزيابي و ميزان بيان ژن با نرم افزار UVItec تعيين شد. نتايج: آزمايش حساسيت دارويي 66 سويه كانديدا آلبيكنس نشان داد كه 6/62 درصد سويه ها حساس، 6/8 درصد وابسته به دوز و 7/28 درصد مقاوم به فلوكونازول هستند. ارزيابي محصول RT-PCR مشخص كرد كه 9 درصد بيماران داراي افزايش بيان ژن مقاومت ERG11 هستند. نتيجه گيري: كانديديازيس دهاني در مبتلايان بهHIV در ايران، شيوعي قابل توجه دارد، نتايج حاصل از اين مطالعه، درصد بالاي مقاومت را در ميان نمونه هاي كانديدا آلبيكنس نشان مي دهد. استفاده از روش مقرون به صرفه انتشار ديسك به همراه روش هايي مانند RT-PCR كه امكان مطالعه روي مكانيسم مقاومت دارويي و ژن هاي دخيل در مقاومت را فراهم مي آورد، پيشنهاد مي شود.

Background and Objective: Nowadays opportunistic fungi especially C. albicans are the most common cause of life-threating infections in immunodeficiency patients. Increasing Azole-resistant strains of C. albicans are a main problem in human immunodeficiency virus-infected patients. The aim of this study was the evaluation of ERG11 gene in C. albicans Azole resistant strains that were isolated from AIDS patients with oropharyngeal candidiasis by RT-PCR method. Materials and Methods: The present experimental study was conducted at Tarbiat Modares University during the years 2009-2011. C.albicans isolates from HIV-infected patients were identified by standard procedures including germ tube formation, clamydoconidia and color of colonies on CHROM agar. At first, susceptibility of C. albicans isolates was assessed by disk diffusion agar technique. Then, overexpression of fluconazole resistance gene ERG11 using RT-PCR was compared with control samples and gene expression levels were determined by UVItec software. Results: The results of drug sensitivity for 66 C. albicans isolated from AIDS patients showed that 62.6% were susceptible, 8.6% were susceptible-dose dependent (SDD) and 28.7% were resistant. Product evaluation of RT-PCR showed that 9% of patients have increased expression of ERG11 gene resistance. Conclusion: Oral candidiasis is a frequent complication among Iranian HIV individuals. The results of this study showed the high percentage of resistant strains among samples of C. albicans. However, the use of phenotypic methods like disk diffusion agar which has lower costs together with genotypic methods like RT-PCR which provide the possibility of studying the mechanism of drug resistance and genes involved is highly recommended.