همسانه سازي ژن گزارشگر luxAB در باكتريهاي بيمارگر گياهي بومي‌ايران Pseudomnas syringae و Ralostonia solanacearum

Cloning of luxAB Reporter Gene into Iranian Plant Pathogen Bacterial IsolatesPseudomonas syringae and Ralostonia solanacerum

توانايي رديابي يك ميكروارگانيسم خاص در شرايط محيطي بسيار دشوار است. بسياري از ژن‌ها مانند ژن لوسيفراز باكتريايي(luxAB) با ايجاد فنوتيپ‌هاي منحصر به فردي مانند توليد نور بيولومينسانس باعث ايجاد افتراق در سويه‌ها مي‌شوند. در تحقيق حاضر ژن luxAB در دو پاتوژن مهم گياهي سودوموناس سرينجي6 و رالوستونيا سولاناساريوم7 توسط روش الكتروپوريشن كلون گرديد. براي لاكس مارك‌دار كردن سويه‌هاي فوق از ترانسپوزون miniTn-5 luxAB استفاده گرديد. سويه‌هاي خالص شده با پلاسميد pUT كه شامل ژن‌هاي luxAB بوده در دستگاه الكتروپوريتور، ترانسفورم گرديدند. الكتروپوريشن سويه‌هاي فوق در ولتاژkv 5/2 و در مدت زمان 5 ميلي ثانيه انجام گرديد. تمامي‌سويه‌هاي لاكس مارك‌دار شده توانايي رشد در محيط كشت كينگ ب8 حاوي 5/12 ميكروگرم در هر ميلي ليتر از محيط كشت تتراسيكلين را دارا بودند. به‌‌علاوه، اندازه گيري ميزان شدت نور لومينسانس توسط دستگاه لومينومتر حاكي از الحاق موفقيت آميز ژن luxAB در دو باكتري فوق مي‌باشد. سويه‌هاي لاكس ماركدار شده سودوموناس سرينجي و رالوستونيا سولاناساريوم به علت بيان پايدار نور لومينسانس، پتانسيل لازم را براي مطالعات بعدي در زمينه اثر شرايط مختلف محيطي بر بقا و فعاليت يك باكتري پاتوژن را دارا مي‌باشند.

The ability to monitor particular microorganism in an environment is a difficult task. Many genes permit the differentiation of strains by conferring production of unique phenotypes such as bioluminescence [marine bacterial luciferase (luxAB)]. Therefore, lux-AB gene was cloned into two endemic plant pathogens Pseudomonas syringae and Ralostonia solanacearum by electrotransformation. lux-marking of above strains was carried out using miniTn-5 luxAB transposon. Purified strains were transformed with plasmid pUT containing luxAB gene by electroporator. Electroporation was performed in voltage 2/5 KV for 5 milisecend. All luxAB marked strains could grow on KB agar medium containing 12.5 µg/ml tetracycline and their luminescence intensity was measured by luminometer. lux-marked P. syringae and R. solanacearum were stable genetically engineered strains making them quite appropriate.