انتقالcDNA گيرنده فعال كننده پراكسيزومي نوع گاما 1 موشي به داخل سلولهاي فيبروبلاست گاوي و بررسي بيان درون سلولي آن به كمك پروتيين گزارشگر فلورسنت سبز

Transfection of mouse PPARgamma1 cDNA in to the bovine fibroblast cells and analysis of its intracellular expression using EGFP gene reporter

هدف از اين پژوهش، بررسي جايگيري cDNA PPAR?1موش در پلاسميد بياني pEGFP-C1 در هسته سلول مورد مطالعه ( فيبروبلاست گاوي) با استفاده از رد يابي ماركر فلورسنتي سبز EGFP مي باشد. براي بررسي الگوي بيان و جهت گيري cDNA PPAR?1 درون هسته سلول‌هاي فيبروبلاست گاوي، پس از تكثير و كلون نمودن آن در پلاسميد بياني مناسب pEGFP-C1 سلول‌ها با µg 2.4 پلاسميد و µl 6 Lipofectamine 2000 ترانسفكت شدند. ماركر EGFP كه به صورت فيوز شده باcDNA PPAR?1بيان مي‌شود، براي رد يابي استفاده شد. با ترانسفكت نمودن سلول‌هاي فيبروبلاست گاوي، پروتيين حاصله عمدتا وارد هسته ها گرديد. همان طور كه انتظار مي رفت، cDNA ژن PPAR?1 موشي كلون گرديده متصل به ژن گزارشگر فلورسنت سبز با موفقيت بيان شده و پروتيين حاصله عمدتا به داخل هسته سلول‌هاي مورد مطالعه، وارد شده است. بنابراين مي‌توان از پلاسميد نوتركيب حاصله براي مطالعات بيشتر جهت بررسي وظيفه ژن PPAR?1 بهره برد و اتصال EGFP به PPAR?1 مانع از جهت يابي داخل سلولي PPAR?1 نمي شود.

The main aim of this research is to study nuclear localization of mouse PPAR?1 cDNA into pEGFP-C1. To investigate the nuclear localization of PPAR?1 protein linked to EGFP marker gene into bovine fibroblast and analysis of intracellular green fluorescency Mouse PPAR?1 cDNA in a mammalian expression vector (pEGFP-C1) in a chimeric cDNA type, encompassing PPAR?1 with EGFP cDNA. EGFP marker was used for monitoring. To confirm the intracellular localization of EGFP- PPAR?1, bovine fibroblast cells were transfected with the 2.4 µg constructed plasmid and 6 µl Lipofectamine 2000. The related product was entered into the nucleus of bovine fibroblasts after transfection of its cDNA. As expected, chimeric cDNA of EGFP-PPAR?1 correctly expressed and related protein was dominantly entered to the nuclei of the cells. Thus the recombinant plasmid could be applicable for further studies to unravel the further aspects of PPAR?1 function. Moreover fusion of EGFP with PPAR?1 does not hamper the nuclear targeting of PPAR?1.