مطالعه ايمونوسيتوشيمي كبد، طحال و روده ماهي قزل‌آلاي رنگين كمان ايمن شده با آنتي ژن ويبريو آنگوييلاروم

Immunocytochemical study on liver, spleen and intestine of rainbow trout immunized with Vibrio anguillarum lipopolysaccharide

زمينه مطالعه: ‌بيماري ويبريوزيس يكي از بيماري‌هاي مهم در صنعت آبزي‌پروري است كه با واكسيناسيون قابل پيشگيري مي‌باشد. هدف: در اين تحقيق بمنظور بررسي موقعيت قرار گرفتن ليپوپلي‌ساكاريد ديواره سلولي باكتري ويبريو آنگوييلاروم به عنوان آنتي‌ژن تزريقي در سطح سلولي بافت‌هاي كبد، طحال و قسمت قدامي‌روده ماهي قزل آلاي رنگين كمان ايمن شده مورد مطالعه ايمونوسيتوشيمي در سطح ميكروسكپ الكتروني قرار گرفت. روش كار: يك ساعت پس از تزريق آنتي‌ژن فوق به روش داخل صفاقي، از بافت‌هاي مورد نظر نمونه‌گيري و مقاطع آماده شده به روش رنگ‌آميزي ايمني غيرمستقيم با استفاده از آنتي بادي‌ پلي‌كلونال خرگوش عليه ليپوپلي‌ساكارايد باكتري، نشاندار شده با پروتيين A متصل به طلا ‌ تهيه شدند. مقاطع بوسيله ميكروسكوپ الكتروني مورد مطالعه قرار گرفته و محل تلاقي آنتي‌ژن و آنتي‌‌بادي نشاندار شده بعنوان مكان‌هاي انتشار ليپوپلي‌ساكارايد در سطح سلول مشخص گرديد. در كنترل نوع اول از آنتي بادي خرگوش متصل به آنتي ژن ويبريو آنگوييلاروم (تركيب آنتي ژن و آنتي بادي) و در كنترل نوع دوم از سرم پيش ايمن خرگوش كه فاقد آنتي بادي بر عليه آنتي ژن‌هاي مورد نظر بود بعنوان كنترل‌هاي منفي استفاده شد. نتايج: در بررسي مقاطع تهيه شده به روش ايمونوسيتوشيمي، مشخص شد كه نشان‌ها در سرتاسر سطوح سلولي بافت‌هاي مذكور اعم از سيتوپلاسم، هسته، فضاي بين سلولي، غشا پايه و بافت همبند توزيع يافته‌اند. در اكثر موارد تراكم نشان‌ها در سيتوپلاسم بيشتر از هسته بود. در مورد كنترل‌هاي منفـي نيـز همچنـان كـه انتـظـار مـي‌رفـت، هيـچ گـونـه نشاني در سطح سلول مشاهده نشد. نتيجه‌گيري‌نهايي: در اين مطالعه نشان داده شد كه ليپوپلي‌ساكارايد ويبريو آنگوييلاروم در تمامي سطوح سلولي كبد، طحال و روده قدامي ماهي قزل آلاي رنگين كمان ايمن شده گسترش يافته بود.

Background: Vibriosis has been recognized as a major bacterial disease in aquaculture industry. The development of effective vaccines has significantly reduced the impact of this disease. Objectives: The aim of this study was to follow distribution of the antigenic Vibrio anguillarum cell wall lipopolysaccharide (LPS) in liver, spleen and anterior intestinal cells of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) using immunocytochemistry. Methods: Rainbow trout was intraperitoneally injected with V. anguillarum LPS. One hour later, liver, spleen and anterior intestine samples were collected to study the LPS distribution in the tissue sections using immunocytochemistry and Transmission Electron Microscope. Rabbit polyclonal antibody against the protein-A gold (pAg) labeled-LPS was applied to show electron density of the pAg using an indirect immunocytochemical method at the site of antigen- antibody interaction on the fish tissues. A pre-absorbed immune rabbit antibody and a pre-immune rabbit serum were considered as negative controls. Results: Results showed that the labels were evenly distributed over cell cytoplasm, nucleus, intracellular spaces, basal membrane and connective tissue in the liver, spleen and anterior intestine. In most cases, more labels were detected in cytoplasm than nucleus while no label was observed in negative controls. Conclusions: Immunocytochemical study of tissues and cells in the immunized fish with V. anguillarum LPS showed extensive distribution of the antigen in hepatocytes, splenocytes and enterocytes.