ارزيابي ميزان جهش JAK2V617F در بيماران ميلو پروليفراتيو مزمن به روش AS-RT-PCR

Evaluation of JAK2V617F mutation prevalence in Myeloproliferative Neoplasm by AS-RT-PCR

زمينه و هدف: جهش اكتسابي JAK2V617F درغالب نيوپلاسم‌هاي ميلوپروليفراتيو مزمن BCR-ABL منفي ديده مي‌شود كه شامل پلي سيتمي ورا، ترومبوسيتمي اوليه و ميلوفيبروز اوليه مي‌باشد. در سـال 2005 ارتبـاط مـا بيـن نيوپلاسـم‌هـاي Polycythemia vera, (PV)Essential Thrombocythemia (ET)PMF(Primary myelofibrosis) از طريق شناسايي يك جهش‌ اكتسابي تيروزين كيناز JAK2V617Fبيشتر مشخص شد. در اين جهش جانشيني گوانين با تيميدين در نوكليوتيد موقعيت 1849 منجر به جايگزيني والين با فنيل آلانين در اسيد آمينه 617 مي‌شود، كه در دومن پسود و كيناز JH2(from JAK- Homology-2) در اگزون 12 از ژن JAK2 بر روي كروموزم 9 قرار گرفته است. اين جهش در سلول‌هاي اجدادي خونساز سبب افزايش حساسيت به فاكتورهاي رشد و سيتوكين‌ها شده و ايجاد ناهنجاري در پروتيين تيروزين كيناز و فسفاتاز مي‌كند. روش بررسي: اين مطالعه روي 58 بيمار صورت گرفت كه 15 نفر ET ، 13 نفر PMF و 30 نفر مبتلا به PV بودند. گزارش جهش بوسيله روش اختصاصي- آلل AS-RT-PCR رويRNA استخراج شده از گلبول‌هاي سفيد و تعيين توالي ‍‍ژن صورت گرفت. داده‌هاي مربوط به 58 بيمار وارد SPSS شد و مورد تجزيه و تحليل آماري به روش Mann-Whitney Test قرار گرفت. يافته ها: اين مطالعه روي 58 بيمارMPN(Myeloproliferative neoplasm) abl-bcr منفي صورت گرفت كه نتايج حاصل از آن شامل 6/86 % (30/26) بيمار پلي سيتمي ورا، 53% (15/8 ) بيمار ترومبوسيتمي اوليه و 5/61% (13/8) بيمار ميلوفيبروز اوليه مي‌باشد. در اين مطالعه بيماران پلي سيتمي ورا كه داراي جهش JAK2 بودند. شمارش گلبول سفيد بيشتري را نشان دادند و بعلاوه تعداد زنان JAK2 مثبت (P=0.03) در پلي سيتمي بيشتر از مردان بود كه نشان دهنده ارتباط اين جهش با جنس مي‌باشد و در ساير گروه‌ها تفاوتي مشاهده نشد. بحث و نتيجه گيري: شناسايي اين جهش در تشخيص افتراقي نيوپلاسم از ميلوپروليفراسيون واكنشي و همچنين تعيين پيش آگهي و پيش بيني پاسخ به درمان مفيد بوده و يك هدف بالقوه براي درمان مي‌باشد. بعلاوه طي مقايسه حساسيت چند روش براي تشخيص جهشJAK2 ، نشان داده شده است كه روشAS-RT PCR در مقايسه با ديگر روش‌ها مثل RFLP، pyrosequencing وARMS-PCR داراي حساسيت بيشتري است. در هر صورت اين جهش راههاي جديدي براي تحقيقات باليني وبنيادي باز كرده و در تشخيص و طبقه بندي MPN تاثير داشته است.

Background and Aim: The JAK2 is an acquired mutation that is observed in majority of patients with classical Philadelphia-negative Myeloproliferative neoplasms that include polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), primary myelofibrosis (PMF). This acquired mutation is characterized by a G to T transversion at nucleotide 1849 in exon 12 of the JAK2 gene, leading to a substitution of valine to phenylalanine at amino acid position 617(V617F) of the JAK2 protein, and result in constitutive JAK2 activation that promotes hypersensitivity to growth factors and cytokines. Materials and Methods: In this study we evaluated RNA from 58 patients with MPNs and statistical analysis was done with mann whitney test. The mutation detected by AS-PCR. In addition, 3 samples were sequenced in Mille gen company. Results: 46 patients:86.6%(26/30) of those with polycythemia vera, 53.3% (8/15) of those with essential thrombocythemia,61.5% (8/13) of those with idiopathic myelofibrosis polycythemia vera patient carrying the mutation displayed higher levels of WBC (p=0.03). on the other hand,16 out of 26 JAK2V617F positive patients were female there is a demonstrate correlation between the presence of a mutant allele and female gender. The difference in other groups were not significant. Discussion and Conclusion: The JAK2V617F mutation has been detected in the vast majority of patients with polycythmia vera (65-95%) and in a lower frequency in patients with essential thrombocythemia (23-57%), idiopathic myelofibrosis (23-57%) and chronic myeloid leukemia 19% (3/16 CML Ph-). Detection of the mutation is helpful in differential diagnosis, prognosis, and prediction of therapeutic response. Key words: JAK2mutation, Allele-Specific PCR, Chronic myeloproliferative Neoplasms, CMPN; JAK2V617F Mutation, Polycythemia Vera, Essential Thrombocythemia, Primary Myelofibrosis