جداسازي سويه‌هاي اشريشياكلي مهاجم (EIEC) از اسهال كودكان با تكنيك واكنش زنجيره‌اي پليمراز(PCR)

Isolation of enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) from diarrhea in children by polymerase chain reaction (PCR) technique

زمينه وهدف: سويه‌هاي اشريشياكلي مهاجم (Enteroinvasive Escherichia coli ; EIEC) دسته‌اي از پاتوتايپ هاي اشريشياكلي مولد اسهال(DEC) بوده و به عنوان عامل اسهال خوني شبه شيگلا در كودكان و بالغين شناخته شده اند. اين سويه‌ها به سروتايپ‌هاي محدودي تعلق داشته و آنتي ژن هاي سوماتيك (O) آنها مشابه آنتي ژن هاي شيگلاها مي باشند. سويه‌هاي EIEC را مي‌توان با بررسي وجود ژن آنتي ژن تهاجمي پلاسميدي (invasive plasmid antigen H ;ipaH) با آزمون مولكولي واكنش زنجيره‌اي پليمراز (PCR) مورد شناسايي قرار داد.از آنجايي كه در كشور ما مطالعات چنداني در رابطه با تعيين فراواني اين سويه‌ها و بررسي اهميت آنها صورت نگرفته است، هدف از اين مطالعه شناسايي اين سويه‌ها با آزمون PCR در اسهال كودكان زير 5 سال شهر تهران بود. روش بررسي: طي يك مطالعه توصيفي، 300 نمونه مدفوع اسهالي مربوط به كودكان زير 5 سال از بيمارستان علي اصغر(ع) و مركز طبي كودكان شهر تهران جمع آوري شده و پس از ارسال به آزمايشگاه ميكروب شناسي، سويه‌هاي اشريشياكلي با كشت برروي محيط كشت هكتون انتريك آگار و انجام تست هاي بيوشيميايي افتراقي جداسازي شدند. وجود ژن آنتي ژن تهاجمي پلاسميدي( invasive plasmid antigen H ;ipaH) در موارد كلني‌هاي تاييد شده سويه‌هاي اشريشياكلي با تكنيك واكنش زنجيره اي پليمراز( PCR) مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: از ميان 300 نمونه اسهالي مورد بررسي با استفاده از روش كشت و آزمون هاي بيوشيميايي افتراقي، 39 مورد(13%) سويه اشريشياكلي مولد اسهال(DEC)جدا سازي شدند.از بين 39 مورد مذكور، 7 سويه(3/2%) اشريشياكلي حاوي ژن ipaH (EIEC) با استفاده از تكنيك واكنش زنجيره‌اي پليمراز(PCR) شناسايي شدند. بحث و نتيجه گيري: جداسازي سويه هاي اشريشياكلي مهاجم (EIEC) در اين مطالعه حاكي از نقش آنها به عنوان يكي از عوامل باكتريايي در ايجاد اسهال بويژه در كودكان زير يك سال در كشور ما مي‌باشد. براي شناسايي دقيق آنها بايد از تكنيك هاي نوين مولكولي بهره گرفت.

Background and Aim: Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) strains include a group of diarrheagenic Escherichia coli (DEC) and are known to cause shigellosis-like symptoms in both adults and children. They belong to a limited number of serotypes and their somatic (O) antigens are identical with, or related to, certain Shigella antigens. EIEC strains are confirmed by demonstration of invasiveness by polymerase chain reaction (PCR) for detection of the ipaH (invasive plasmid antigen H) gene that is specific for these strains among DEC.Since in our country,Iran study for detection of these strains. hasnot been carried out therefore the aim of this study was detection of EIEC in diarrheal under 5 year old children in Tehran. Materials and Methods: During the descriptive study,300stool samples were collected from children with diarrhea in Ali Asghar Hospital and children medicinal center of Tehran during 4 months (April-Jul 2008). E.coli species were isolated by standard bacteriological and biochemical tests. Presence of invasive plasmid antigen H (ipaH) gene in confirmed colonies was investigated by PCR technique. Results: Among 300 stool specimens studied using culture method and biochemical tests,39(13%) E.coli species were isolated. Among these 39 strains,7(2.3%) strains containing ipaH gene (EIEC) were detected by PCR technique. Discussion and Conclusion: Enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) in our country, Iran, may be as bacterial pathogen causing childhood diarrhea. Therefore we should apply new techniques for investigation of these strains. Key words: Enteroinvasive Escherichia coli(EIEC), Diarrhea, Children, Polymerase Chain Reaction(PCR)