بررسي تاثير مهار mir-150 بر بيان زنجيره آلفاي هموگلوبين در رده سلوليK562

Effect On Alpha Hemoglobin Chain Expression In K562 Cell Line

زمينه و هدف: ريز RNA ها ، مولكولهاي كوچك غير كدكننده‌اي هستند كه در پروسه‌هاي متعدد سلولي از قبيل پروليفراسيون، تمايز، آپوپتوزيس و سرطان شركت دارند . مطالعات اخير كاهش سطح mir-150 را در تمايز پيش سازهاي خوني به رده اريتروييدي نشان داده‌اند. از آنجايي كه بيان هموگلوبين شاخص مهمي در تمايز اريتروييدي مي‌باشد، دراين مطالعه تاثير سركوب mir-150 بر بيان زنجيره هموگلوبين آلفا در رده سلولي اريترولوكميك K562 بررسي شده است. روش بررسي: رده سلوليK562 در شرايط استاندارد كشت داده شده و پس از بهينه نمودن شرايط انتقال داده شد. سركوب mir-150 توسط روش miRNA real time-PCR تاييد شدو سپس بيان زنجيره آلفا با روش RT-PCRنشان داده شد. در نهايت، با استفاده از RT-PCR كمي ، تغييرات بيان زنجيره مزبور نسبت به سلول كنترل مورد سنجش قرار گرفت. يافته ها: مطابق انتظار، كاهش دادن سطح mir-150 باعث افزايش بيان زنجيره آلفا گرديد، به طوري كه سطح اين زنجيره هموگلوبيني در مقايسه با سلول كنترل و scrambleبيش از 10 برابر افزايش نشان مي داد. آناليز داده ها نشان از معني دار بودن تغييرات بيان زنجيره آلفا نسبت به سلول كنترل بود(P < 0.05). نتيجه گيري: سركوب mir-150 به طور چشم گيري سبب افزايش زنجيره الفا گرديد كه در نتيجه پس از مطالعات تكميلي هدف مناسبي در زمينه تالاسمي آلفا مي‌باشد. همچنين با مطالعات بيشتر و شناسايي ژنهاي هدف miRNA هاي دخيل در روندهاي تمايز اريتروييدي، مي‌توان در آينده از پتانسيل‌هاي تشخيصي و درماني آنها بخصوص در ژن درماني و پزشكي ترميمي بهره برد.

Background and Aim: MicroRNAs (miRNA) are small noncoding RNA molecules that transcribed by RNA polymerase II. After biogenesis, these molecules act by incorporation into the RNA-induced silencing complex (RISC). MiRNAs are involved in multiple physiological and pathological processes such as proliferation, differentiation, apoptosis and cancer. Recently several studies reported down regulation of mir-150 during erythropoesis. Since hemoglobin expression is valuable indicator of erythroid differentiation we evaluated the mir-150 downregulation effect on alpha chain expression by Quantitative RT-PCR. Materials and Methods: K562cells were grown in RPMI1640 in standard condition. K562 cells were transfected by microRNA 150 Inhibitor using transfection kit .Mir-150 downregulation was confirmed by miRNA Real time PCR, followed by Q-RT-PCR to investigate the alpha chain expression changes. Results: By relative QRT-PCR the alpha chain expression was increased 10 folds in comparison to untransfected and scramble cells. Furthermore, the differences were statistically significant (P < 0.05) Conclusion: Elevation of alpha chain expression in our study showed that mir-150 downregulation has a crucial role in erythroid differentiation and can introduce as a novel marker in alpha thalassemia. Further researches to find out the detail mechanism and miRNAs genes target could improve our knowledge about miRNAs potential in management of diseases and their applications in gene therapy and regenerative medicine. Key Words: MiRNA, Mir-150, Erythroeid, Alpha Chain